環(huán)介導(dǎo)恒溫擴增技術(shù)（LAMP），因操作簡便，能快速、精確地進行基因擴增而得到廣泛的應(yīng)用。LAMP使用的酶是有鏈置換效應(yīng)的Bst DNA聚合酶，其原理如圖1所示，請回答下列問題：

（1）LAMP技術(shù)溫度控制在63℃左右，與常規(guī)PCR相比，其簡化之處是不需要
變性、復(fù)性、延伸過程的循環(huán)（或溫度循環(huán)）
變性、復(fù)性、延伸過程的循環(huán)（或溫度循環(huán)）
；另一個簡化之處是通過肉眼觀察有無白色沉淀焦磷酸鎂即可判斷靶基因是否復(fù)制，推測其中的焦磷酸來自
dNTP
dNTP
水解。
（2）如圖1，針對靶基因上的6個區(qū)域設(shè)計了4條引物，其中決定主要產(chǎn)物長度的是
2條內(nèi)部引物（或FIP、BIP）
2條內(nèi)部引物（或FIP、BIP）
，由引物F3延伸出子鏈的作用是
促進鏈置換，增加模板數(shù)量
促進鏈置換，增加模板數(shù)量
。部分單鏈DNA兩端成環(huán)狀，環(huán)狀結(jié)構(gòu)中局部雙鏈的形成依賴
堿基互補配對
堿基互補配對
原則。
（3）將LAMP技術(shù)用于獼猴桃褪綠環(huán)斑相關(guān)病毒（AcCRaV）的核酸檢測，為找到最適宜的靶序列擴增溫度，研究者設(shè)定56-63℃溫度梯度，并進行染色、電泳等操作后，得到如圖2實驗結(jié)果。據(jù)圖可知，此靶序列最佳擴增的溫度為
62
62
℃，電泳后出現(xiàn)梯形條帶，該結(jié)果說明
LAMP技術(shù)擴增得到的DNA不等長
LAMP技術(shù)擴增得到的DNA不等長
。
（4）將LAMP技術(shù)用于新冠病毒（SARS-CoV-2）的核酸檢測，先要進行如下操作：

實驗步驟簡要操作過程

采集樣本
采集樣本
用醫(yī)用棉簽從上呼吸道采集咽拭子或鼻拭子，然后低溫封存并送檢測機構(gòu)進行檢測

提取RNA
提取RNA
向樣本中加入Trizol裂解蛋白質(zhì)成分，再加入氯仿并離心，吸取上層水相置于新的EP離心管中，加入等體積的異丙醇，離心棄上清液，加入乙醇洗滌，離心棄上清液，晾干后加入DEPC水解液破壞RNA水解酶。

合成cDNA 向樣本中加入緩沖液、
逆轉(zhuǎn)錄酶、引物
逆轉(zhuǎn)錄酶、引物
和dNTP，在PCR儀中獲得cDNA產(chǎn)物。

【答案】變性、復(fù)性、延伸過程的循環(huán)（或溫度循環(huán)）；dNTP；2條內(nèi)部引物（或FIP、BIP）；促進鏈置換，增加模板數(shù)量；堿基互補配對；62；LAMP技術(shù)擴增得到的DNA不等長；采集樣本；提取RNA；逆轉(zhuǎn)錄酶、引物

【解答】

【點評】

聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。

發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：17引用：1難度：0.5

相似題

1．循環(huán)閾值（Ct值）是通過一定的技術(shù)手段，使病毒的擴增產(chǎn)物達到可檢測水平所需的循環(huán)次數(shù)。新冠肺炎診療方案（第九版）把感染者出院標準規(guī)定為兩次核酸檢測Ct值均＞35。下列說法錯誤的是（　?。?/h2>

A．Ct值為40和Ct值為35的核酸擴增產(chǎn)物的量可能相等

B．Ct值越高，則表示病毒濃度越高，檢測所需的時間越長

C．一般來說，確診者出現(xiàn)癥狀時，Ct值較低，體內(nèi)病毒濃度較高

D．質(zhì)量分數(shù)75%的酒精可使新冠病毒的蛋白質(zhì)變性從而達到消殺的目的

發(fā)布：2024/11/13 7:30:1組卷：10引用：4難度：0.7

A．可以選用引物組合是①和②，之所以不用①和③是這兩種引物結(jié)合的模板鏈相同

B．不能選用引物①和④，是因為選用④無法確定啟動子和終止子之間是否插入HMA3基因

C．導(dǎo)入HMA3基因之后，楊樹的一條染色體上可能存在多個HMA3基因

D．導(dǎo)入HMA3基因，楊樹發(fā)生的可遺傳變異類型為染色體結(jié)構(gòu)變異

發(fā)布：2024/11/13 5:0:1組卷：22引用：1難度：0.5

A．該實驗中所用的P1、P2、P3三種引物均為單鏈DNA

B．R基因被T-DNA插入后導(dǎo)致基因突變，可能無法表達相應(yīng)蛋白

C．用P1、P2引物進行PCR得到產(chǎn)物的個體均為R基因純合子

D．若調(diào)查樣本量足夠大，W、H、M個體的比例約為1：2：1

發(fā)布：2024/11/15 2:30:2組卷：51引用：3難度：0.7

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實驗步驟	簡要操作過程
采集樣本采集樣本	用醫(yī)用棉簽從上呼吸道采集咽拭子或鼻拭子，然后低溫封存并送檢測機構(gòu)進行檢測
提取RNA 提取RNA	向樣本中加入Trizol裂解蛋白質(zhì)成分，再加入氯仿并離心，吸取上層水相置于新的EP離心管中，加入等體積的異丙醇，離心棄上清液，加入乙醇洗滌，離心棄上清液，晾干后加入DEPC水解液破壞RNA水解酶。
合成cDNA	向樣本中加入緩沖液、逆轉(zhuǎn)錄酶、引物逆轉(zhuǎn)錄酶、引物和dNTP，在PCR儀中獲得cDNA產(chǎn)物。