中國(guó)甜柿的自然脫澀與乙醛代謝關(guān)鍵酶基因（PDC）密切相關(guān)，推測(cè)澀味程度可能與PDC基因的表達(dá)情況有關(guān)。為篩選PDC基因的調(diào)控蛋白，科研人員構(gòu)建了質(zhì)粒A和質(zhì)粒G（ 如圖1、圖2 所示），利用酵母菌進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)探究。
（1）啟動(dòng)子位于基因首端，是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)，啟動(dòng)子區(qū)域還存在著許多調(diào)控蛋白的結(jié)合位點(diǎn)，可影響基因的轉(zhuǎn)錄水平。PDC基因的啟動(dòng)子序列未知，為獲得大量該基因啟動(dòng)子所在片段，可利用限制酶將基因組DNA進(jìn)行酶切，然后在DNA連接酶DNA連接酶的作用下將已知序列信息的接頭片段連接在PDC基因的上游，根據(jù)接頭片段和PDC基因編碼序列設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCRPCR。
（2）利用質(zhì)粒A構(gòu)建含有PDC基因啟動(dòng)子片段的重組質(zhì)粒并導(dǎo)入代謝缺陷型酵母菌，用不含尿嘧啶尿嘧啶的培養(yǎng)基可篩選出成功轉(zhuǎn)化的酵母菌Y1H。質(zhì)粒G上的AD基因表達(dá)出的AD蛋白與啟動(dòng)子足夠靠近時(shí)，能夠激活后續(xù)基因轉(zhuǎn)錄，因此需獲得待測(cè)蛋白與AD蛋白的融合蛋白用于后續(xù)篩選?？蒲腥藛T從中國(guó)甜柿中提取RNA，將逆轉(zhuǎn)錄形成的各種cDNAcDNA與質(zhì)粒G連接后導(dǎo)入酵母菌，此時(shí)應(yīng)選擇質(zhì)粒G中的位點(diǎn)22（填序號(hào)1～5）作為cDNA的插入位點(diǎn)，最終獲得攜帶不同cDNA片段的酵母菌群Y187。
（3）重組酵母Y187與Y1H能夠進(jìn)行接合生殖，形成的接合子含有兩種酵母菌質(zhì)粒上的所有基因。若接合子能在含有金擔(dān)子素的培養(yǎng)基中生存，則推測(cè)待測(cè)蛋白是PDC基因的調(diào)控蛋白，請(qǐng)結(jié)合圖3闡述作出該推測(cè)的理由接合子中待測(cè)蛋白與AD蛋白形成了融合蛋白，若待測(cè)蛋白是PDC基因的調(diào)控蛋白，就能與PDC基因啟動(dòng)子結(jié)合，AD蛋白也能靠近PDC基因啟動(dòng)子并激活金擔(dān)子素抗性基因的表達(dá)，使酵母菌表現(xiàn)出金擔(dān)子素抗性接合子中待測(cè)蛋白與AD蛋白形成了融合蛋白，若待測(cè)蛋白是PDC基因的調(diào)控蛋白，就能與PDC基因啟動(dòng)子結(jié)合，AD蛋白也能靠近PDC基因啟動(dòng)子并激活金擔(dān)子素抗性基因的表達(dá)，使酵母菌表現(xiàn)出金擔(dān)子素抗性。
（4）篩選出 PDC 基因的調(diào)控蛋白后，為滿足生產(chǎn)上的需要對(duì)其進(jìn)行改良，這種技術(shù)屬于蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)工程，該工程的起點(diǎn)是預(yù)期蛋白質(zhì)的功能預(yù)期蛋白質(zhì)的功能。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．
【答案】RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合；DNA連接酶；PCR；尿嘧啶；cDNA；2；接合子中待測(cè)蛋白與AD蛋白形成了融合蛋白，若待測(cè)蛋白是PDC基因的調(diào)控蛋白，就能與PDC基因啟動(dòng)子結(jié)合，AD蛋白也能靠近PDC基因啟動(dòng)子并激活金擔(dān)子素抗性基因的表達(dá)，使酵母菌表現(xiàn)出金擔(dān)子素抗性；蛋白質(zhì)；預(yù)期蛋白質(zhì)的功能
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：104引用：6難度：0.5
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過(guò)基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得?；蛭膸?kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開(kāi)始時(shí)，解開(kāi)DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過(guò)程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，常見(jiàn)的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒(méi)有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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