圖甲為構(gòu)建重組質(zhì)粒過(guò)程中的三種備選質(zhì)粒,其中Ap為氨芐青霉素抗性基因,Tc為四環(huán)素抗性基因。圖乙為培育轉(zhuǎn)AFPs基因(抗凍基因)番茄的示意圖,外源DNA和質(zhì)粒上均標(biāo)出了酶切位點(diǎn)及相關(guān)抗性基因,請(qǐng)回答下列問(wèn)題。

(1)圖甲中通常選用質(zhì)粒C構(gòu)建重組質(zhì)粒,而不選用質(zhì)粒A或質(zhì)粒B的原因分別是 質(zhì)粒A中沒(méi)有標(biāo)記基因,質(zhì)粒B的復(fù)制原點(diǎn)中含有HindⅢ酶切位點(diǎn)質(zhì)粒A中沒(méi)有標(biāo)記基因,質(zhì)粒B的復(fù)制原點(diǎn)中含有HindⅢ酶切位點(diǎn)。
(2)據(jù)圖乙分析,若需使用插入滅活法篩選并鑒定重組質(zhì)粒,應(yīng)優(yōu)先選用限制酶 BamHⅠ和HindⅢBamHⅠ和HindⅢ切割目的基因和質(zhì)粒。
(3)從cDNA文庫(kù)中獲得的目的基因 不含有不含有(填“含有”或“不含有”)啟動(dòng)子和終止子。
(4)在構(gòu)建基因表達(dá)載體過(guò)程中常把兩個(gè)啟動(dòng)子串聯(lián)在一起形成雙啟動(dòng)子,加在目的基因上游。雙啟動(dòng)子的作用可能是 保證目的基因的高效轉(zhuǎn)錄保證目的基因的高效轉(zhuǎn)錄。
(5)為使改造后的AFPs基因能夠表達(dá),人工設(shè)計(jì)質(zhì)粒D并對(duì)它的多個(gè)酶切位點(diǎn)進(jìn)行研究。若用HindⅢ酶或KpnⅠ酶單獨(dú)切割質(zhì)粒D,均獲得一條長(zhǎng)鏈,若用HindⅢ酶和EcoRⅠ酶同時(shí)切割,則獲得2個(gè)500bp和1個(gè)2666bp片段,若用KpnⅠ酶和EcoRⅠ酶同時(shí)切割,則獲得2個(gè)250bp和1個(gè)3166bp片段。若以HindⅢ酶切割位點(diǎn)為計(jì)算起點(diǎn),則KpnⅠ酶切割位點(diǎn)與HindⅢ酶切割位點(diǎn)最短長(zhǎng)度為 750bp750bp,EcoRⅠ酶的兩個(gè)切割位點(diǎn)與HindⅢ切割位點(diǎn)的最短距離為 500bp500bp。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合.
【答案】質(zhì)粒A中沒(méi)有標(biāo)記基因,質(zhì)粒B的復(fù)制原點(diǎn)中含有HindⅢ酶切位點(diǎn);BamHⅠ和HindⅢ;不含有;保證目的基因的高效轉(zhuǎn)錄;750bp;500bp
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布:2024/4/20 14:35:0組卷:2引用:1難度:0.7
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