美籍華人錢永健、美國的沙爾菲和日本的下村修因在研究綠色熒光蛋白（GFP）等方面的突出貢獻，獲得2008年度諾貝爾化學獎．GFP會發(fā)出綠色熒光，該蛋白質(zhì)在生物工程中有著廣闊的應用前景．請據(jù)圖回答相關問題：
（1）圖中重組質(zhì)粒的形成，需要用限制酶對目的基因和質(zhì)粒進行剪切．如果限制酶Ⅰ的識別序列和切點（用“↓”表示）是-G↓GATCC-，限制酶Ⅱ的識別序列和切點是-↓GATC-；在質(zhì)粒上有酶Ⅰ的一個切點，在目的基因的兩側各有一個酶Ⅱ的切點．質(zhì)粒和目的基因經(jīng)過上述兩種不同的限制酶處理后，在DNA連接酶的作用下 能能（填“能”或“不能”）連接成重組質(zhì)粒，理由是 由兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端相同（或可以互補）由兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端相同（或可以互補）．
（2）在②過程中對轉基因體細胞進行篩選，比較簡易的方法是通過設備檢測被培養(yǎng)的細胞 是否發(fā)出綠色熒光是否發(fā)出綠色熒光；綠色熒光蛋白在轉基因體細胞的 核糖體核糖體中合成，寫出這一過程中的遺傳信息傳遞圖解：GFP基因轉錄mRNA翻譯綠色熒光蛋白GFP基因轉錄mRNA翻譯綠色熒光蛋白．
（3）在③過程中培養(yǎng)重組細胞時，培養(yǎng)液中通常含有 葡萄糖葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清等．
（4）在核移植過程中，供體細胞一般要選用傳代到 1010代以內(nèi)的轉基因體細胞，原因是 能保持細胞正常的二倍體核型能保持細胞正常的二倍體核型；乙兔提供的細胞應是 （次級）卵母細胞（次級）卵母細胞．
（5）錢永健通過 蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)工程技術，改變氨基酸排序，造出能吸收并發(fā)出不同顏色光的熒光蛋白，并能讓它們發(fā)光更久、更強烈．
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【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】能；由兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端相同（或可以互補）；是否發(fā)出綠色熒光；核糖體；GFP基因mRNA綠色熒光蛋白；葡萄糖；10；能保持細胞正常的二倍體核型；（次級）卵母細胞；蛋白質(zhì)
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【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：46引用：3難度：0.5
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1．基因工程技術又稱為DNA重組技術，回答相關問題：
（1）在基因工程中，獲取目的基因主要有兩大途徑，即和從中分離．
（2）利用某植物的成熟葉片為材料，同時構建cDNA文庫和基因組文庫，兩個文庫相比，cDNA文庫中含有的基因數(shù)目比基因組文庫中的少，其原因是．
（3）在基因表達載體中，啟動子是聚合酶識別并結合的部位．若采用原核生物作為基因表達載體的受體細胞，最常用的原核生物是．
（4）將目的基因?qū)胫参锛毎麜r，采用最多的方法是法．發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：2引用：1難度：0.3 -
2．科研人員利用大腸桿菌構建了抗蟲基因文庫。最新研究發(fā)現(xiàn)漏斗蜘蛛中的AH基因控制合成的毒素肽具有顯著的殺蟲效果，現(xiàn)以p-B質(zhì)粒為載體，構建 AH基因的cDNA文庫。圖1表示p-B質(zhì)粒，其中Cm/表示氯霉素抗性基因，cdB 基因表達產(chǎn)物能抑制大腸桿菌 DNA 復制。圖中箭頭表示相關限制酶的酶切位點，且不同種限制酶識別序列不同，其中AiuI、XbaI、SspI和MfeⅠ識別的堿基序列和酶切位點分別是 AG'CT、T'CTAGA、AAT'ATT、C'AATTG。請分析并回答下列問題：
（1）為獲得AH基因的cDNA，先要從漏斗蜘蛛毒素肽分泌細胞中提取，再通過合成出AH基因的cDNA。若從漏斗蜘蛛其他組織細胞提取，則難以成功，原因是。
（2）若已知AH基因的cDNA兩端部分序列為：5'-AACTATGCGC……CGTAGCCTCT-3'，請寫出PCR擴增該cDNA時的兩個引物對應的局部序列（前10個堿基序列），并標明5'和3'端：，。一個初始雙鏈cDNA經(jīng)四輪循環(huán)后，共消耗這兩種引物的數(shù)量為個。
（3）利用圖中的質(zhì)粒和AH基因構建重組質(zhì)粒時，宜選用限制酶雙酶切質(zhì)粒，再選用限制酶切割目的基因，將切割后獲得的DNA片段混合，經(jīng)DNA連接酶處理后，再與大腸桿菌混合培養(yǎng)，在含有適量氯霉素的培養(yǎng)基中添加適量冷的，以促進轉化。
（4）經(jīng)上述處理培養(yǎng)后，其中能繁殖的大腸桿菌中應含有的質(zhì)粒是，原因是。發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：8引用：1難度：0.6 -
3．基因治療是指將外源正?；?qū)氚屑毎?，以糾正或補償因基因缺陷和異常引起的疾病，以達到治療的目的．干擾素基因缺失的小鼠不能產(chǎn)生成熟淋巴細胞，科研人員利用胚胎干細胞（ES細胞）對干擾素基因缺失的小鼠進行了基因治療．請回答：
（1）為使干擾素基因在小鼠細胞中高效表達，需要把來自cDNA文庫的干擾素基因片段正確插入基因表達載體的和之間．
（2）將干擾素基因?qū)隕S細胞的方法是，采用可以鑒定目的基因是否插入到受體細胞染色體DNA分子上，再將能正常表達干擾素的細胞轉入到小鼠體內(nèi)，這種治療方法稱為．導入ES細胞而不是導入上皮細胞是因為ES細胞在功能上具有．
（3）干擾素基因缺失的小鼠易患某種細菌導致的肺炎，引起這種現(xiàn)象的原因是小鼠缺少成熟的淋巴細胞，降低了小鼠免疫系統(tǒng)的功能．
（4）用于基因治療的基因有三類，一類是把正?；?qū)胗谢蛉毕莸募毎?，以表達出正常性狀來治療，第二類是反義基因，即通過產(chǎn)生的mRNA分子與病變基因產(chǎn)生的進行互補結合，來阻斷非正常蛋白質(zhì)的合成；第三類是編碼可以殺死癌細胞的蛋白酶基因．發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：24引用：2難度：0.5
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