某實驗室需構(gòu)建含增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（eGFP）基因的表達(dá)載體用于科學(xué)研究。相關(guān)資料如下：
①雙鏈DNA的每一條鏈有兩個末端，分別是5′端和3′端，從左到右的5′-3′DNA鏈?zhǔn)蔷幋a鏈，從左到右的3′-5′DNA鏈?zhǔn)悄０彐湣?br />②增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（eGFP）在自然光下顯示綠色，已知該基因的DNA編碼序列如下：5′ATGGTGAGC……AAGTAA3′。
③質(zhì)粒載體中含有EcoRⅠ、HindⅢ、BamHI、XbaⅠ和NotⅠ等酶的酶切位點（這些酶各自的識別序列不同），如圖所示。
回答下列問題：
（1）增強(qiáng)型綠色熒光蛋白基因轉(zhuǎn)錄的mRNA堿基序列為5’AUGGUGAGC……AAGUAA3’5’AUGGUGAGC……AAGUAA3’。
（2）通過PCR方法獲得eGFP目的片段，首先需要設(shè)計一對一對（填“一對”或“一個”）引物，在體外選擇性擴(kuò)增eGFP目的片段，PCR反應(yīng)一般由95℃熱變性、55～60℃引物和模板配對、72℃延伸三個步驟，經(jīng)過多次循環(huán)完成。延伸階段選用72℃是綜合考慮了兩個因素，這兩個因素是防止DNA變性防止DNA變性和保存Taq酶所需溫度條件保存Taq酶所需溫度條件。
（3）eGFP的PCR產(chǎn)物兩端分別含有BamHⅠ和NotⅠ的酶切位點，構(gòu)建重組表達(dá)載體時，用這兩種酶酶切PCR產(chǎn)物和質(zhì)粒載體。與單一酶酶切相比，該實驗采用的雙酶切方法的優(yōu)點是防止目的基因與質(zhì)粒任意連接防止目的基因與質(zhì)粒任意連接（答一點即可）。
（4）將所構(gòu)建的表達(dá)載體轉(zhuǎn)入大腸桿菌，涂布含有卡那霉素的平板，若表達(dá)載體構(gòu)建成功，可觀察到多個綠色熒光綠色熒光單菌落。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】5’AUGGUGAGC……AAGUAA3’；一對；防止DNA變性；保存Taq酶所需溫度條件；防止目的基因與質(zhì)粒任意連接；綠色熒光
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：97引用：2難度：0.5
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發(fā)布：2024/12/20 3:30:1組卷：6引用：1難度：0.6
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