2.HSV-1是單純皰疹病毒的一種類型,HSV-1病毒顆粒的組裝主要由包裝信號序列(a′)介導(dǎo)。科研人員從HSV-1基因組中分離出a′,利用基因工程技術(shù)構(gòu)建了質(zhì)粒pHSL并進(jìn)行了相關(guān)實驗,流程如圖1。請回答下列問題。
注:LacZ的表達(dá)產(chǎn)物β-半乳糖苷酶能將無色化合物X-gal水解產(chǎn)生藍(lán)色物質(zhì)而使細(xì)胞變藍(lán)
(1)過程①先用
酶將HSV-1的DNA酶解成若干片段,再利用
與含有a′的酶解片段進(jìn)行雜交,根據(jù)陽性信號逐步篩選出盡可能短的a′所在片段。
(2)過程②中使用的限制酶是
。過程③采用的方法是
。過程④在轉(zhuǎn)染、培養(yǎng)Vero細(xì)胞時,常在培養(yǎng)液中添加動物血清,其目的是
。
(3)tsK株是具有感染性的HSV-1溫度敏感株。在tsK株的輔助下,pHSL能組裝成假病毒(不含完整病毒基因組的顆粒),從而獲得tsK株和含假病毒的混合毒株。圖2是Vero細(xì)胞連續(xù)傳代過程中,混合毒株的滴度(代表單位體積液體中病毒顆粒的多少)變化曲線及每代中假病毒的占比(柱形圖)。
①研究中,選用
代混合毒株用于后續(xù)神經(jīng)細(xì)胞的接種實驗可減少tsK株可能造成的細(xì)胞毒性,理由是
。
②為驗證假病毒能否感染體外培養(yǎng)的神經(jīng)細(xì)胞并表達(dá)LacZ基因,科研人員將混合毒株與大鼠神經(jīng)細(xì)胞按一定比例在
℃下混合培養(yǎng)48h,用含
(物質(zhì))的檢測液檢測發(fā)現(xiàn)大約20%的細(xì)胞變藍(lán),說明
。