19世紀(jì)末，巴斯德開(kāi)創(chuàng)了第一次疫苗革命，其特點(diǎn)是接種滅活或減毒的病原微生物。20世紀(jì)70年代開(kāi)始，現(xiàn)代生物技術(shù)的迅猛發(fā)展開(kāi)創(chuàng)了第二次疫苗革命，使疫苗的研制進(jìn)入分子水平。圖1是通過(guò)基因工程制備乙型肝炎表面抗原（HbsAg）從而獲得乙肝疫苗的過(guò)程。
在圖1步驟①和③中，需要用合適的限制酶切割乙肝表面抗原基因和質(zhì)?！，F(xiàn)將乙肝表面抗原基因及質(zhì)粒的部分限制酶的識(shí)別序列及位置表示為圖2。質(zhì)粒中的啟動(dòng)子是質(zhì)粒中基因得以正常表達(dá)所必需的部分。LacZ基因合成某種酶，該酶能將無(wú)色染料X-gal變成藍(lán)色，最終能在含無(wú)色染料X-gal的培養(yǎng)基上將含該基因的菌落染成藍(lán)色。
| 限制酶 | EcoRⅠ | BclⅠ | BamHⅠ | HindⅢ |
| 識(shí)別序列及切割位點(diǎn) | 5'-G↓AATTC-3' | 5'-T↓GATCA-3' | 5'-G↓GATCC-3' | 5'-A↓AGCTT-3' |
無(wú)內(nèi)含子、啟動(dòng)子、終止子等序列
無(wú)內(nèi)含子、啟動(dòng)子、終止子等序列
，構(gòu)建cDNA文庫(kù)第一步需要 逆轉(zhuǎn)錄
逆轉(zhuǎn)錄
酶。（2）為了避免自身環(huán)化及便于篩選，切割質(zhì)粒選用的限制酶是
BamHⅠ和HindⅢ
BamHⅠ和HindⅢ
，切割乙肝表面抗原基因選用的限制酶是 BclⅠ和HindⅢ
BclⅠ和HindⅢ
。（3）為篩選含有乙肝表面抗原的大腸桿菌細(xì)胞，需要將導(dǎo)入操作之后的大腸桿菌接種到含
氨芐青霉素和無(wú)色染料X-gal
氨芐青霉素和無(wú)色染料X-gal
的固體牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上，挑選 白色/未被染成藍(lán)色
白色/未被染成藍(lán)色
的菌落純化培養(yǎng)。（4）在圖1步驟④中，使用的基因工程工具酶是
DNA連接酶
DNA連接酶
。在一個(gè)乙肝表面抗原基因與一個(gè)質(zhì)粒重組的過(guò)程中（圖1步驟④），游離的磷酸基團(tuán)數(shù)目減少 4
4
個(gè)。（5）若運(yùn)用PCR技術(shù)檢測(cè)乙肝表面抗原基因是否導(dǎo)入，需根據(jù)目的基因的序列設(shè)計(jì)
PCR引物
PCR引物
，利用待檢DNA為模板進(jìn)行PCR。PCR過(guò)程包括多次循環(huán)，每個(gè)循環(huán)分為3個(gè)步驟：①變性
變性
②退火/復(fù)性
退火/復(fù)性
③延伸。（6）下列有關(guān)限制酶的敘述，錯(cuò)誤的是
B
B
。A.限制酶催化的反應(yīng)類(lèi)型是水解反應(yīng)
B.限制酶破壞的是氫鍵
C.一種限制酶只能識(shí)別雙鏈DNA中某種特定的脫氧核苷酸序列
D.EcoRⅠ與HindⅢ相比較，EcoRⅠ酶切后的DNA片段較容易分離
（7）基因工程的誕生，帶動(dòng)了現(xiàn)代生物技術(shù)的迅猛發(fā)展，下列關(guān)于基因工程的敘述，正確的是
B
B
。A.以蛋白質(zhì)的氨基酸序列為依據(jù)合成的目的基因與原基因的堿基序列相同
B.基因工程可以定向改造生物的性狀
C.基因工程經(jīng)常以抗生素的抗性基因?yàn)槟康幕?br />D.限制性核酸內(nèi)切酶一般能識(shí)別多種核苷酸序列
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．
【答案】無(wú)內(nèi)含子、啟動(dòng)子、終止子等序列；逆轉(zhuǎn)錄；BamHⅠ和HindⅢ；BclⅠ和HindⅢ；氨芐青霉素和無(wú)色染料X-gal；白色/未被染成藍(lán)色；DNA連接酶；4；PCR引物；變性；退火/復(fù)性；B；B
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：9引用：1難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過(guò)基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得?；蛭膸?kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開(kāi)始時(shí)，解開(kāi)DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過(guò)程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，常見(jiàn)的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒(méi)有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6