長期高血糖可引發(fā)血管細胞衰老。科研人員為研究S蛋白在因高血糖引發(fā)的血管細胞衰老中的作用，以腺病毒為載體將編碼S蛋白的S基因導入血管細胞，實現S蛋白在血管細胞中的大量表達。
（1）腺病毒的遺傳物質為DNA，其復制需要E1、E2、E3基因共同完成。為將S基因導入腺病毒，科研人員首先構建了含S基因的重組質粒，如圖1所示。在構建含S基因的重組質粒時，通過設計S基因特異的引物進行PCR設計S基因特異的引物進行PCR的方法可鑒定重組質粒是否插入了S基因。將圖1中含S基因的重組質粒用PacⅠPacⅠ酶切割后，獲得改造后的腺病毒DNA；將其導入A細胞（A細胞含有E3基因，可表達E3蛋白），如圖2所示。腺病毒DNA在A細胞內能夠復制并指導腺病毒外殼蛋白的合成復制并指導腺病毒外殼蛋白的合成，從而產生大量重組腺病毒，腺病毒進入宿主細胞后不整合到宿主細胞染色體上。
（2）綜合上述信息，從生物安全性角度分析重組腺病毒載體的優(yōu)點：重組腺病毒只能在A細胞中復制，即使侵染其他細胞，也不能復制；重組腺病毒進入宿主細胞后不整合到宿主細胞染色體上；腺病毒是人工改造的載體，不含致病基重組腺病毒只能在A細胞中復制，即使侵染其他細胞，也不能復制；重組腺病毒進入宿主細胞后不整合到宿主細胞染色體上；腺病毒是人工改造的載體，不含致病基（寫出2點）。
（3）用含S基因的重組腺病毒分別感染正常人及糖尿病患者的血管細胞，使S蛋白在血管細胞中大量表達。對正常人、糖尿病患者及二者轉入S基因后血管細胞中能促進細胞衰老的I蛋白進行檢測，結果如圖3所示（顏色越深代表表達量越高）?？捎?!--BA-->抗原-抗體雜交抗原-抗體雜交方法檢測I蛋白的表達量：實驗結果顯示糖尿病患者糖尿病患者血管細胞中I蛋白表達量最高，推測S蛋白對高血糖引發(fā)的血管細胞衰老的作用及機制是S蛋白通過降低Ⅰ蛋白的含量，抑制高血糖引發(fā)的血管細胞衰老S蛋白通過降低Ⅰ蛋白的含量，抑制高血糖引發(fā)的血管細胞衰老
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】設計S基因特異的引物進行PCR；PacⅠ；復制并指導腺病毒外殼蛋白的合成；重組腺病毒只能在A細胞中復制，即使侵染其他細胞，也不能復制；重組腺病毒進入宿主細胞后不整合到宿主細胞染色體上；腺病毒是人工改造的載體，不含致病基；抗原-抗體雜交；糖尿病患者；S蛋白通過降低Ⅰ蛋白的含量，抑制高血糖引發(fā)的血管細胞衰老
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：32引用：5難度：0.7
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發(fā)布：2024/12/20 5:0:2組卷：35難度：0.6 -
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（2）為確保目的基因定向插入了質粒，應該選擇（填酶）切割目的基因和質粒。在培養(yǎng)基中加入（填“氨芐青霉素”或“四環(huán)素”）對目的基因進行篩選。
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限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅠ NbeⅠ MunⅠ 識別序列及切割位點 G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG 
發(fā)布：2024/12/20 3:30:1組卷：6引用：1難度：0.6
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