肺炎克雷伯氏菌是獲得性肺炎主要的致病菌??咕幬锏牟缓侠硎褂?,導(dǎo)致肺炎克雷伯氏菌耐藥株增多、耐藥性增強。噬菌體是一類細菌性病毒,被認為是最具前景的抗生素替代品。為研究探索應(yīng)用裂解性噬菌體防治多重耐藥肺炎克雷伯氏菌引起的小鼠肺炎,研究人員進行了以下實驗。
(1)噬菌體體外抑菌實驗
材料與用具:LB培養(yǎng)基,肺炎克雷伯氏菌懸液,感染復(fù)數(shù)(MOI)分別為10、1、0.1的噬菌體phage1513,PBS(磷酸鹽平衡生理鹽水),恒溫振蕩培養(yǎng)箱,比色計。
(要求與說明:感染復(fù)數(shù)指侵染時噬菌體與細菌個數(shù)之比,感染復(fù)數(shù)越高,裂解越快。肺炎克雷伯氏菌數(shù)量每小時測一次,可通過測定波長650nm的光密度值并計算,具體方法不作要求)
完善實驗思路:
①取4個反應(yīng)器皿,加入等量LB液體液體(液體/固體)培養(yǎng)基。
②分組如下:
A組:3mL肺炎克雷伯氏菌懸液+3mLPBS
B組:3mL菌液+3mL感染復(fù)數(shù)為10的噬菌體phage1513
C組:3mL菌液+3mL感染復(fù)數(shù)為1的噬菌體phage1513
D組:3mL菌液+3mL感染復(fù)數(shù)為0.1的噬菌體phage1513
③置于恒溫振蕩培養(yǎng)箱37℃、150rpm培養(yǎng),用比色計每隔1h測定650nm處光密度值用比色計每隔1h測定650nm處光密度值。
④統(tǒng)計分析數(shù)據(jù),并在坐標圖上畫出預(yù)測結(jié)果:
(2)噬菌體體內(nèi)治療實驗
采用腹腔注射的方式對小鼠進行麻醉,滴鼻20μL肺炎克雷伯氏菌懸液,建立肺炎小鼠模型。滴鼻菌液后2h,3個實驗組以滴鼻給藥方式分別給予小鼠20μL感染復(fù)數(shù)為10、1、0.1的噬菌體,對照組滴鼻給予小鼠20μL的PBS緩沖液。自滴鼻菌液開始,每12h記錄死亡小鼠數(shù)量。實驗結(jié)果如圖:
據(jù)圖可得到的結(jié)論有:①噬菌體在體內(nèi)可以有效地治療肺炎克雷伯氏菌引起的小鼠肺炎噬菌體在體內(nèi)可以有效地治療肺炎克雷伯氏菌引起的小鼠肺炎;②感染復(fù)數(shù)越高,噬菌體對小鼠肺炎感染的保護作用越強感染復(fù)數(shù)越高,噬菌體對小鼠肺炎感染的保護作用越強。
(3)分析與討論
①從變異的角度分析,肺炎克雷伯氏菌出現(xiàn)耐藥性的原因是基因突變基因突變。
②噬菌體能夠在血液及其他組織中循環(huán),但也會被抗體中和,影響其裂解效果。在急性感染治療早期,抗體中和作用并不能成為治療的障礙,原因是噬菌體活動要遠遠快于抗體的產(chǎn)生(產(chǎn)生抗體需要一段時間)噬菌體活動要遠遠快于抗體的產(chǎn)生(產(chǎn)生抗體需要一段時間)。如果噬菌體中和抗體能夠在整個噬菌體治療過程中一直出現(xiàn),可通過重復(fù)給藥噬菌體(加大噬菌體給藥劑量)重復(fù)給藥噬菌體(加大噬菌體給藥劑量)達到治療效果。
【考點】噬菌體侵染細菌實驗.
【答案】液體;用比色計每隔1h測定650nm處光密度值;噬菌體在體內(nèi)可以有效地治療肺炎克雷伯氏菌引起的小鼠肺炎;感染復(fù)數(shù)越高,噬菌體對小鼠肺炎感染的保護作用越強;基因突變;噬菌體活動要遠遠快于抗體的產(chǎn)生(產(chǎn)生抗體需要一段時間);重復(fù)給藥噬菌體(加大噬菌體給藥劑量)
【解答】
【點評】
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發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:5引用:1難度:0.7
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