組織型纖溶酶原激活劑(tPA)是體內(nèi)纖溶系統(tǒng)的生理性激動(dòng)劑,也是一種新型的血栓溶解劑。生長(zhǎng)激素(GH)可促進(jìn)動(dòng)物細(xì)胞增殖和乳腺生長(zhǎng)發(fā)育及維持泌乳,在動(dòng)物遺傳育種領(lǐng)域具有重要的功能。研究人員將GH基因?qū)朕D(zhuǎn)tPA基因小鼠體內(nèi),獲得雙轉(zhuǎn)基因小鼠,以期提高小鼠乳汁中的tPA表達(dá)量?;卮鹣铝袉?wèn)題:
(1)首先構(gòu)建GH基因的表達(dá)載體,如圖所示:
GH基因上游的CMV能被
RNA聚合酶
RNA聚合酶
識(shí)別并結(jié)合,從而開(kāi)啟轉(zhuǎn)錄過(guò)程;若GH基因是通過(guò)反轉(zhuǎn)錄得到的,則其與原基因的差異在于編碼區(qū)不包含
內(nèi)含子
內(nèi)含子
序列。
(2)對(duì)卵細(xì)胞供體和受體小鼠進(jìn)行同期發(fā)情處理,還要給供體小鼠注射
促性腺激素
促性腺激素
,以 促進(jìn)其超數(shù)排卵,然后與轉(zhuǎn)tPA基因公鼠交配。供體小鼠受精后,處死小鼠,獲取受精卵,將GH基因表達(dá)載體用
顯微注射
顯微注射
法導(dǎo)入受精卵中。將轉(zhuǎn)基因受精卵轉(zhuǎn)移至受體小鼠體內(nèi),待仔鼠出生。
(3)若要測(cè)定GH基因是否成功導(dǎo)入小鼠細(xì)胞核,取仔鼠的
尾部
尾部
(填“骨髓”“乳腺”或“尾部”)細(xì)胞檢測(cè)更加方便;若要對(duì)GH基因和tPA基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增,需提取細(xì)胞基因組DNA,并設(shè)計(jì)
4
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種引物。
(4)雙轉(zhuǎn)基因小鼠長(zhǎng)大后,選取健康個(gè)體,使其交配產(chǎn)仔后,收集其
乳汁
乳汁
測(cè)定其中的tPA蛋白含量。若要觀察GH基因是否促進(jìn)了tPA基因的表達(dá),還需測(cè)定
只轉(zhuǎn)tPA基因
只轉(zhuǎn)tPA基因
小鼠的tPA蛋白含量。