Rag₂基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細胞?？蒲腥藛T利用胚胎干細胞（ES細胞）對Rag₂基因缺失小鼠進行基因治療。其技術(shù)流程如圖：

（1）步驟①中，在核移植前應去除卵母細胞的

細胞核

細胞核

。小鼠體細胞體外培養(yǎng)時，所需氣體主要是O₂和CO₂，其中CO₂的作用是維持培養(yǎng)液（基）的

pH值（或酸堿度）

pH值（或酸堿度）

。
（2）步驟②中，重組胚胎培養(yǎng)到

囊胚

囊胚

期時，可從其內(nèi)細胞團分離出ES細胞。體外培養(yǎng)條件下，ES細胞在

飼養(yǎng)層

飼養(yǎng)層

細胞上，能夠維持只增殖不分化的狀態(tài)。
（3）步驟③中，需要構(gòu)建含有Rag₂基因的表達載體。可以根據(jù)Rag₂基因的

核苷酸序列

核苷酸序列

設計引物，利用PCR技術(shù)擴增Rag₂基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分別在片段兩側(cè)進行酶切獲得Rag₂基因片段。為將該片段直接連接到表達載體，所選擇的表達載體上應具有

HindⅢ和PstⅠ

HindⅢ和PstⅠ

酶的酶切位點。
（4）為檢測Rag₂基因的表達情況，可提取治療后小鼠骨髓細胞的

蛋白質(zhì)

蛋白質(zhì)

，用

抗Rag₂蛋白

抗Rag₂蛋白

的抗體進行雜交實驗。