23．酵母細胞基因轉(zhuǎn)錄需要轉(zhuǎn)錄因子，轉(zhuǎn)錄因子包括DNA結合功能域（DNA-BD）和轉(zhuǎn)錄激活結構域（DNA-AD），兩結構域分開時不能激活轉(zhuǎn)錄。如果將待測蛋白質(zhì)X與DNA-BD融合，蛋白質(zhì)Y與DNA-AD融合，蛋白質(zhì)X和Y有相互作用時，兩結構域能重新呈現(xiàn)完整轉(zhuǎn)錄因子活性，并可激活報告基因的轉(zhuǎn)錄，過程如圖1所示。已知報告基因LacZ表達的酶可以將無色化合物X-gal水解成藍色產(chǎn)物。研究人員為了驗證蛋白質(zhì)X和Y是否具有相互作用，分別構建不同的酵母表達載體（如圖2和圖3所示），其中Amp
r為氨芐青霉素（抑制細菌細胞壁的形成）抗性基因，HIS3和TRPⅠ分別為控制組氨酸和色氨酸合成的基因。請回答下列問題：
（1）研究小組采用了巢式PCR技術獲取蛋白質(zhì)X和Y基因的編碼區(qū)序列，技術原理是利用兩套PCR引物進行兩輪PCR擴增（如圖4所示），首先利用第一對引物（外引物）對目的基因所在DNA進行15～30個循環(huán)的擴增；第二輪擴增以第一輪擴增產(chǎn)物為模板，利用第二對引物（內(nèi)引物或巢式引物）進行15～30個循環(huán)擴增。相比于常規(guī)PCR獲得的產(chǎn)物而言，巢式PCR獲得的產(chǎn)物特異性
（“強”或“弱”），原因是
。
（2）研究人員的主要技術路線如表所示，請完善下表：
| 實驗目的 |
方法步驟要點（部分） |
| 獲取X和Y基因的編碼區(qū)序列 |
巢式PCR擴增蛋白質(zhì)Y編碼區(qū)序列時需在兩個① （填寫“內(nèi)”、“外”或“內(nèi)和外”）引物的5?端分別添加序列② ；為驗證目的基因在PCR擴增時是否發(fā)生了基因突變，可對PCR產(chǎn)物進行③ 。 |
| pLexA-JL和pB42AD載體的構建 |
用特定限制酶切割目的基因和載體并連接，連接產(chǎn)物導入大腸桿菌后擴增；為確定質(zhì)粒構建是否成功，需要抽提兩種質(zhì)粒并酶切，
電泳后觀察④ 。 |
| 轉(zhuǎn)化酵母細胞 |
將成功構建的載體通過⑤ 法導入到營養(yǎng)缺陷型酵母菌中，培養(yǎng)基中需添加物質(zhì)有⑥ （用下列字母填寫）。
a.氨芐青霉素
b.色氨酸
c.亮氨酸
d.X-gal
e.瓊脂
f.甲硫氨酸 |
| 實驗驗證 |
通過觀察培養(yǎng)基中⑦ 來驗證蛋白質(zhì)X和Y是否具有相互作用。 |
（3）酵母雙雜交技術在研究和鑒定蛋白質(zhì)互作方面起著重要的作用，下列選項中適合采用此技術進行研究的有
。
A.在細胞體內(nèi)檢測抗原和抗體能否發(fā)生相互作用
B.判斷控制某一性狀的兩對基因是否能夠獨立遺傳
C.判斷RNA聚合酶與某啟動子的結合是否具有組織特異性
D.篩選宿主細胞上能與新冠病毒S刺突蛋白特異性結合的受體
