22．酵母菌絮凝是指菌體細胞間通過細胞壁相互粘附、聚集成團的現(xiàn)象。適當提高酵母的絮凝能力，有助于發(fā)酵后細胞和產物的分離，節(jié)約生產成本。科研人員為研究R基因對酵母菌絮凝性能的影響，用基因工程技術獲得了R基因被敲除的酵母菌菌株，主要步驟如圖1（G418為一種氨基糖苷類抗生素）。據(jù)圖回答：
（1）過程①，引物2和引物4分別添加了MluⅠ的識別序列，則引物1和引物3的5'端分別添加
的識別序列，PCR獲取R基因左右兩端的N和C片段過程中，除圖中條件外，還需提供
等條件（至少寫三個）。
（2）利用含
的培養(yǎng)基篩選出重組酵母，再挑取單菌落進行PCR擴增，驗證酵母細胞R基因是否被敲除，則擴增時選擇引物組合是
。
（3）科研人員繼續(xù)將野生酵母菌和R基因敲除酵母菌的菌液接種到裝有麥芽汁的錐形瓶中，一定條件下靜置發(fā)酵7天，測定酒精發(fā)酵能力和絮凝能力，結果如下表。
| 指標種類 |
酒精發(fā)酵能力 |
絮凝能力 |
| 野生酵母菌 |
4.5% |
63.1% |
| R基因敲除酵母菌 |
4.5% |
83.1% |
①酒精發(fā)酵期間，每個錐形瓶應注意保持
條件和定期排氣。
②實驗結果表明，R基因敲除酵母菌是否符合生產需求？請說出你的判斷依據(jù)。
。
（4）科研人員又將不同濃度梯度的R基因敲除酵母菌菌液和野生酵母菌菌液點樣于含30g/mL鈣熒光白（細胞壁抑制劑，破壞細胞壁的正常組裝）的YPD培養(yǎng)基上，結果如圖2。推測R基因敲除酵母菌絮凝能力變化的原因是
。
