25.與棉花發(fā)育相關(guān)的GhMADS12基因能調(diào)節(jié)棉花根、莖、葉、花的發(fā)育和果實的成熟??茖W(xué)家將克隆得到的GhMADS12基因與運載體結(jié)合構(gòu)建基因表達載體的過程如圖所示。請回答下列問題:
(1)若用PCR技術(shù)擴增GhMADS12基因,需要在PCR儀中加入
種引物,引物的作用是
。除了引物、DNA模板之外,PCR反應(yīng)體系中還需提供
。(至少答2條)
(2)GhMADS12 和pBI121質(zhì)粒T-DNA經(jīng)限制酶SmaⅠ和XbaⅠ切割斷開的化學(xué)鍵是
。原核生物中的限制酶不切割自身DNA的原因是
。
(3)圖中的CaMV35S為啟動子,GUS為標(biāo)記基因,NOS為終止子,據(jù)圖分析,目的基因GhMADS12插入的具體位點是
。
A.啟動子的上游
B.啟動子的下游,終止子的上游
C.終止子的下游
D.任意位點
(4)ChMADS12基因進入大腸桿菌細胞并在大腸桿菌細胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達的過程稱為
,該過程常用Ca
2+處理細胞,使細胞處于能吸收周圍DNA分子的生理狀態(tài),這種細胞稱為
。