甲型血友?。℉A）是血液中凝血因子Ⅷ（FⅧ）遺傳性缺陷導(dǎo)致的遺傳性出血性疾病，我國(guó)科學(xué)家利用乳腺特異性表達(dá)啟動(dòng)子（α-LA）使重組人凝血因子Ⅷ在家兔中特異且高效的表達(dá)。據(jù)圖回答下列問(wèn)題：

（1）耐高溫的DNA聚合酶進(jìn)行DNA復(fù)制時(shí)會(huì)沿著子鏈的5'→3'方向延伸。利用PCR技術(shù)對(duì)乳腺特異性表達(dá)啟動(dòng)子（α-LA）進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)，應(yīng)該選用圖中的引物

2和3

2和3

。四次循環(huán)后產(chǎn)生的DNA分子中，只含有一個(gè)引物的DNA分子占DNA分子總數(shù)的

1

8

1

8

。
（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，常常會(huì)使用兩種不同的限制酶處理目的基因和運(yùn)載體，原因是若使用同一種限制酶，經(jīng)

DNA連接

DNA連接

酶連接以后，除了會(huì)產(chǎn)生基因表達(dá)載體以外，還會(huì)有一些特殊的DNA，如

目的基因與目的基因相連、運(yùn)載體和運(yùn)載體相連、運(yùn)載體和目的基因自身環(huán)化

目的基因與目的基因相連、運(yùn)載體和運(yùn)載體相連、運(yùn)載體和目的基因自身環(huán)化

（至少答兩種）。
（3）將基因表達(dá)載體導(dǎo)入受精卵常用的方法是

顯微注射技術(shù)

顯微注射技術(shù)

。將重組細(xì)胞培養(yǎng)成胚胎的過(guò)程需要培養(yǎng)液，該營(yíng)養(yǎng)液成分一般比較復(fù)雜，除了需要添加維生素、激素、氨基酸、核苷酸和血清外，還需要添加

有機(jī)鹽和無(wú)機(jī)鹽

有機(jī)鹽和無(wú)機(jī)鹽

。
（4）將家兔早期胚胎移植到代孕母兔中，因?yàn)?

受體對(duì)移植到子宮的外來(lái)胚胎幾乎不發(fā)生排異反應(yīng)

受體對(duì)移植到子宮的外來(lái)胚胎幾乎不發(fā)生排異反應(yīng)

，這樣胚胎才能在受體體內(nèi)存活。為鑒定實(shí)驗(yàn)兔的基因組中是否含有人凝血因子Ⅷ基因，一般采用

DNA分子雜交技術(shù)

DNA分子雜交技術(shù)

方法。