CRISPR/Cas9系統(tǒng)可對基因組進行定點編輯，其工作原理如圖1所示。該系統(tǒng)主要包含單鏈向?qū)NA和Cas9酶兩個部分，能特異性識別并結(jié)合特定的DNA序列，從而引導(dǎo)Cas9酶到相應(yīng)位置并剪切DNA，最終實現(xiàn)對靶基因序列的編輯。請回答下列問題：
（1）圖1為CRISPR/Cas9系統(tǒng)作用示意圖，該系統(tǒng)能精準識別相關(guān)基因的原理是sgRNA與目標(biāo)DNA發(fā)生 堿基互補配對堿基互補配對，Cas9酶可催化 磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵（化學(xué)鍵名稱）水解，剪切特定DNA片段。
（2）LMNA基因編碼的核纖層蛋白與維持細胞核正常形態(tài)有關(guān)?？蒲腥藛T利用CRISPR/Cas9技術(shù)對體外培養(yǎng)的HepG2（人源肺癌細胞）細胞株進行基因編輯，獲得了LMNA基因敲除的穩(wěn)定細胞系。
①體外培養(yǎng)的HepG2時需要一定比例的O2和CO2，其中CO2的主要作用是 維持培養(yǎng)液pH值維持培養(yǎng)液pH值；培養(yǎng)基除滅菌外還需要通過 定期更換培養(yǎng)液（添加一定量的抗生素/無菌操作）定期更換培養(yǎng)液（添加一定量的抗生素/無菌操作）來保證無菌無毒環(huán)境。
②HepG2細胞中沒有編碼Cas9的基因，需將Cas9基因及sgRNA基因拼接形成拼接基因并與質(zhì)粒結(jié)合導(dǎo)入HepG2細胞，用圖2中的質(zhì)粒以及含Cas9-sgRNA拼接基因的DNA片段構(gòu)建表達載體時，應(yīng)選用 EcoRIEcoRI進行酶切。
③將構(gòu)建好的表達載體與用 Ca2+（CaCl2）Ca2+（CaCl2）處理的細菌置于適宜反應(yīng)體系中培養(yǎng)。然后將培養(yǎng)的細菌涂布于含 嘌呤霉素嘌呤霉素的平板培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)，24h后挑取菌落，提取質(zhì)粒作為模板，選擇圖3中引物組合 ⅡⅡ和 ⅢⅢ，通過PCR和電泳技術(shù)鑒定是否重組成功。
④用鑒定成功的工程菌對HepG2細胞進行轉(zhuǎn)染，培養(yǎng)三天后收集HepG2細胞，提取基因組，對其 堿基/核苷酸堿基/核苷酸序列進行檢測，判斷Cas9-sgRNA拼接基因是否導(dǎo)入成功。若從細胞水平進行檢測，可以檢測HepG2細胞數(shù)目增長量或 細胞核形態(tài)細胞核形態(tài)。
【答案】堿基互補配對；磷酸二酯鍵；維持培養(yǎng)液pH值；定期更換培養(yǎng)液（添加一定量的抗生素/無菌操作）；EcoRI；Ca2+（CaCl2）；嘌呤霉素；Ⅱ；Ⅲ；堿基/核苷酸；細胞核形態(tài)
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：23引用：2難度：0.5
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
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3．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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