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PHB2蛋白具有抑制細胞增殖的作用。為初步探究某動物PHB2蛋白抑制人宮頸癌細胞增殖的原因,研究者從基因數(shù)據庫中獲取了該蛋白的基因編碼序列(簡稱phb2基因),大小為0.9kb(1kb=1000堿基對),利用大腸桿菌表達該蛋白?;卮鹣铝袉栴}:
相關限制酶的識別序列及切割位點(注:箭頭表示切割位點)
名稱 識別序列及切割位點 名稱 識別序列及切割位點
HindⅢ A↓AGCTT
TTCGA↑A
EcoRⅠ G↓AATTCCTTAA↑G
PvitⅡ CAG↓CTGGTC↑GAC PstⅠ CTGC↓AG
GA↑CGTC
KpnⅠ G↓GTACCCCATG↑G BamHⅠ G↓GATCCCCTAG↑G
(1)圖1為所用載體圖譜示意圖,圖中限制酶的識別序列及切割位點見表。為使phb2基因(該基因序列不含圖1中限制酶的識別序列)與載體正確連接,在擴增的phb2基因兩端分別引入
EcoRⅠ和
EcoRⅠ和
PvitⅠ
PvitⅠ
兩種不同限制酶的識別序列。對于酶切的phb2基因和載體進行連接,選擇兩種限制酶切比用一種限制酶切好的原因:
可以防止目的基因和質粒的自身環(huán)化,也可以防止目的基因和質粒的反向連接
可以防止目的基因和質粒的自身環(huán)化,也可以防止目的基因和質粒的反向連接

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注:M為指示分子大小的標準參照物;小于0.2kb的DNA分子條帶未出現(xiàn)在圖中
(2)將轉化后的大腸桿菌接種在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng),隨機挑取單菌落(分別編號為1、2、3、4)培養(yǎng)并提取質粒,用(2)中選用的兩種限制酶進行酶切,酶切產物經電泳分離,結果如圖2,
3
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號菌落的質粒很可能是含目的基因的重組質粒。
(3)根據PHB2cDNA的核苷酸序列設計了相應的引物如圖,通過PCR擴增PHB2基因。已知A位點和B位點分別是起始密碼子和終止密碼子對應的基因位置。選用的引物組合應為
引物1和引物4
引物1和引物4
,pcr擴增時選取的DNA往往類似于圖,而目的基因往往只是其中的一個片段類似于AB段,當pcr擴增至第四輪循環(huán)時等長的目的基因片段占
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【考點】基因工程的原理
【答案】EcoRⅠ和;PvitⅠ;可以防止目的基因和質粒的自身環(huán)化,也可以防止目的基因和質粒的反向連接;3;引物1和引物4;
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【解答】
【點評】
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