α-抗胰蛋白酶是一種主要由肝細胞合成的血漿蛋白，具有維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的功能?？蒲腥藛T利用乳腺生物反應器獲得了α-抗胰蛋白酶。回答下列問題：
（1）將人正常干細胞系L-02培養(yǎng)在某動物細胞培養(yǎng)基中，在37℃、5%CO₂的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。CO₂的主要作用是

維持培養(yǎng)液的pH值

維持培養(yǎng)液的pH值

。待細胞培養(yǎng)至對數(shù)生長末期，用

胰蛋白

胰蛋白

酶消化，進行細胞計數(shù)和離心收集，提取RNA，經(jīng)

逆轉錄

逆轉錄

（填過程）最終獲得α-抗胰蛋白酶基因。
（2）利用PCR技術擴增α-抗胰蛋白酶基因時，科研人員在兩個引物的

5'端

5'端

（填“5'端”或“3'端”）各添加一種限制酶的酶切位點，在該端添加的理由是

DNA復制方向是由5'端到3'端

DNA復制方向是由5'端到3'端

。α-抗胰蛋白酶基因兩端添加不同的限制酶切割位點的目的是

防止自身連接環(huán)化

防止自身連接環(huán)化

。
（3）將α-抗胰蛋白酶基因與牛乳腺中

乳蛋白

乳蛋白

的啟動子等調(diào)控組件重組在一起，構建成基因表達載體。若將α-抗胰蛋白酶基因直接導入牛受精卵中，往往不能獲得所需的轉基因牛，理由是

直接將其導入受體細胞，很可能會被降解或不能表達

直接將其導入受體細胞，很可能會被降解或不能表達

。
（4）將含基因表達載體的受精卵置于早期胚胎培養(yǎng)液中進行培養(yǎng)，早期胚胎進行移植前，需進行性別鑒定。性別鑒定的操作思路是

取囊胚滋養(yǎng)層細胞做DNA分析性別鑒定

取囊胚滋養(yǎng)層細胞做DNA分析性別鑒定

。
（5）轉基因牛成年后需對其α-抗胰蛋白酶基因的表達產(chǎn)物進行檢測，一般采用

抗原—抗體雜交

抗原—抗體雜交

法。