白細(xì)胞介素是一類淋巴因子.研究人員將人白細(xì)胞介素的基因?qū)氲浇湍讣?xì)胞中,使其分泌出有活性的白細(xì)胞介素.
(1)為增加白細(xì)胞介素基因的數(shù)量,可使用
PCR
PCR
技術(shù),但前提是必須知道基因的已知序列,目的是設(shè)計(jì)引物
設(shè)計(jì)引物
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(2)在重組載體導(dǎo)入酵母菌細(xì)胞之前,需用Ca2+
Ca2+
處理酵母菌,白細(xì)胞介素基因進(jìn)入酵母菌細(xì)胞內(nèi),并且在其細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程,稱為轉(zhuǎn)化
轉(zhuǎn)化
.在表達(dá)過程中,啟動子需與RNA聚合酶
RNA聚合酶
識別和結(jié)合,從而驅(qū)動轉(zhuǎn)錄過程.
(3)在體液免疫過程中,白細(xì)胞介素是由T淋巴
T淋巴
細(xì)胞分泌的,為了能成功表達(dá)出白細(xì)胞介素,不使用細(xì)菌,而使用酵母細(xì)胞作為受體細(xì)胞,可能原因是細(xì)菌細(xì)胞中無內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等加工白細(xì)胞介素的細(xì)胞器
細(xì)菌細(xì)胞中無內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等加工白細(xì)胞介素的細(xì)胞器
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(4)在分泌型表達(dá)載體和白細(xì)胞介素基因所在的DNA分子上均有多個限制酶的酶切位點(diǎn),圖示過程獲得有效表達(dá)的重組載體使用了EcoRl和EcoR52兩種限制酶,比使用單一的限制酶,其優(yōu)點(diǎn)是防止目的基因、表達(dá)載體發(fā)生自身環(huán)化或者防止目的基因反向接入到分泌型表達(dá)載體中
防止目的基因、表達(dá)載體發(fā)生自身環(huán)化或者防止目的基因反向接入到分泌型表達(dá)載體中
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