新冠病毒（+RNA）的刺突蛋白S通過與人體黏膜細(xì)胞表面的ACE2受體結(jié)合而進(jìn)入細(xì)胞，是宿主抗體的重要作用位點。下圖1是科研人員利用新冠病毒的+RNA提取S蛋白基因和S蛋白受體結(jié)合域RBD基因作為抗原基因序列，研制新冠病毒雙抗原疫苗的技術(shù)路線。已知PCR1與PCR2要分別進(jìn)行，然后將產(chǎn)物混合，使用引物1和引物4進(jìn)行PCR3，最終獲得大量S-RBD融合基因（1300bp）。
（1）PCR3過程中，片段1與片段2連接形成S-RBD融合基因，需要使用 耐高溫DNA聚合耐高溫DNA聚合酶，該酶的作用是 將單個的脫氧核苷酸連接到引物的3'端將單個的脫氧核苷酸連接到引物的3'端。
（2）為使S-RBD融合基因在工程菌中表達(dá)時，先合成S蛋白，在重組pX質(zhì)粒中，引物4對應(yīng)的區(qū)段要連接在靠近 啟動子啟動子（填“啟動子“或“終止子”）的部位，原因是 原核細(xì)胞中基因表達(dá)時可以邊轉(zhuǎn)錄邊翻譯，引物4對應(yīng)的區(qū)段靠近啟動子時先轉(zhuǎn)錄出S蛋白的mRNA序列原核細(xì)胞中基因表達(dá)時可以邊轉(zhuǎn)錄邊翻譯，引物4對應(yīng)的區(qū)段靠近啟動子時先轉(zhuǎn)錄出S蛋白的mRNA序列。
（3）為初步檢測過程B構(gòu)建是否成功，對重組pX系列質(zhì)粒及其酶切產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳檢測，結(jié)果如圖2。據(jù)圖可知，酶切時用到的酶是 HindⅢ、Ndel、EcoRIHindⅢ、Ndel、EcoRI，重組質(zhì)粒pX2和pX5構(gòu)建成功的依據(jù)是 重組質(zhì)粒pX2和pX5酶切后形成的750和550片段堿基對總和為S—RBD融合基因長度1300重組質(zhì)粒pX2和pX5酶切后形成的750和550片段堿基對總和為S—RBD融合基因長度1300。
（4）在工程菌的篩選時，可先后用兩種抗生素進(jìn)行影印培養(yǎng)實驗（將首次培養(yǎng)的菌落用滅菌絨布沾取印到新培養(yǎng)基上培養(yǎng)），在第二次培養(yǎng)時存活的菌落是否含有目的基因 否否（填“是”或“否”）。鑒定pX質(zhì)粒是否導(dǎo)入工程菌還可以采用的方法是 觀察菌落是否具有熒光，有熒光的則含有pX質(zhì)粒觀察菌落是否具有熒光，有熒光的則含有pX質(zhì)粒。
（5）試從免疫學(xué)角度分析此種雙抗原疫苗比常規(guī)S蛋白疫苗更具優(yōu)勢的原因 此種雙抗原疫苗含有S蛋白受體結(jié)合域RBD，有利于進(jìn)入靶細(xì)胞，從而激發(fā)細(xì)胞免疫此種雙抗原疫苗含有S蛋白受體結(jié)合域RBD，有利于進(jìn)入靶細(xì)胞，從而激發(fā)細(xì)胞免疫。
【答案】耐高溫DNA聚合；將單個的脫氧核苷酸連接到引物的3'端；啟動子；原核細(xì)胞中基因表達(dá)時可以邊轉(zhuǎn)錄邊翻譯，引物4對應(yīng)的區(qū)段靠近啟動子時先轉(zhuǎn)錄出S蛋白的mRNA序列；HindⅢ、Ndel、EcoRI；重組質(zhì)粒pX2和pX5酶切后形成的750和550片段堿基對總和為S—RBD融合基因長度1300；否；觀察菌落是否具有熒光，有熒光的則含有pX質(zhì)粒；此種雙抗原疫苗含有S蛋白受體結(jié)合域RBD，有利于進(jìn)入靶細(xì)胞，從而激發(fā)細(xì)胞免疫
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：17引用：2難度：0.5
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（2）為確保目的基因定向插入了質(zhì)粒，應(yīng)該選擇（填酶）切割目的基因和質(zhì)粒。在培養(yǎng)基中加入（填“氨芐青霉素”或“四環(huán)素”）對目的基因進(jìn)行篩選。
（3）培育轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種的核心工作是圖中過程（填序號）。過程②③采用的方法是。
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發(fā)布：2024/12/20 3:30:1組卷：6引用：1難度：0.6
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