CD47是一種跨膜糖蛋白,肺癌、結腸癌等多種腫瘤細胞表面的CD47含量明顯高于正常細胞。研究發(fā)現(xiàn),利用抗體抑制腫瘤細胞表面的CD47蛋白的活性,可促進巨噬細胞吞噬腫瘤細胞。為制備抗CD47的單克隆抗體,科學家按如圖1流程進行相關實驗。請回答下列問題:
(1)圖1EcoRI等均為限制酶,Kan
r、Tc
r分別為卡那霉素抗性基因、四環(huán)素抗性基因。為了構建基因表達載體,應該選用
BamHI和XhoI
BamHI和XhoI
酶切割外源DNA和質粒DNA。
(2)為篩選成功導入重組質粒的大腸桿菌,利用圖中兩種標記基因,篩選出
能在含卡那霉素的培養(yǎng)基上生長,而不能在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長
能在含卡那霉素的培養(yǎng)基上生長,而不能在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長
的大腸桿菌,利用該菌種獲得大量CD47蛋白。
(3)圖2中①是指從小鼠
脾臟
脾臟
中獲得免疫后B細胞,經過選擇性培養(yǎng)的雜交瘤細胞,還需進行操作②
克隆化培養(yǎng)和抗體檢測
克隆化培養(yǎng)和抗體檢測
才可獲得能分泌抗CD47抗體的雜交瘤細胞。體外培養(yǎng)該細胞獲得大量單克隆抗體,需要滿足以下條件:無菌無毒環(huán)境,充足的營養(yǎng)和適宜溫度與pH,含有
95%空氣加5%CO2
95%空氣加5%CO2
的氣體環(huán)境。
(4)為驗證抗CD47抗體對巨噬細胞吞噬腫瘤細胞的促進作用,研究人員將巨噬細胞和腫瘤細胞共同培養(yǎng),加入適量抗CD47抗體,測定巨噬細胞的吞噬能力。要得出該結論還需要進行的操作是
共同培養(yǎng)巨噬細胞和腫瘤細胞,但不加入抗CD47抗體,測定巨噬細胞的吞噬能力
共同培養(yǎng)巨噬細胞和腫瘤細胞,但不加入抗CD47抗體,測定巨噬細胞的吞噬能力
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