圖1為生產轉基因抗蟲棉時使用的質粒，圖2為生產轉基因抗蟲棉時所用目的基因側翼涉及的限制酶的酶切位點。
（1）為了高效地構建基因表達載體，最好選用 HindⅢ和BamHⅠHindⅢ和BamHⅠ（填限制酶名稱）同時酶切質粒和目的基因。
（2）為了篩選出基因表達載體，需要將DNA連接酶處理后的溶液與大腸桿菌混合在一起進行培養(yǎng)。為了促使大腸桿菌吸收外源DNA，需要用 CaCl2 或（Ca2+）CaCl2 或（Ca2+）處理大腸桿菌使其處于感受態(tài)。隨后再將大腸桿菌涂布在含 氨苯青霉素氨苯青霉素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，一般情況下這樣培養(yǎng)出來的大腸桿菌有兩種類型：一種是結合了目的基因的質粒，一種是未結合目的基因的質粒?？梢约尤?HindⅢ和BamHⅠHindⅢ和BamHⅠ分別去切割兩種質粒，其中結合了目的基因的質粒在酶切后能產生目的基因。
（3）圖示質粒在設計時插入了T-DNA序列，并且將啟動子、多克隆位點和終止子序列插入到T-DNA中（注：插入不會破壞T-DNA的作用），T-DNA的作用是 將 T‐DNA 之間的DNA序列轉移并整合至受體細胞的染色體DNA上將 T‐DNA 之間的DNA序列轉移并整合至受體細胞的染色體DNA上。
（4）有人擔心基因工程中使用的抗性基因可轉移至近緣生物中，本例中的質粒能否有助于降低氨芐青霉素抗性基因轉移到近緣生物的風險？為什么？
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】HindⅢ和BamHⅠ；CaCl2 或（Ca2+）；氨苯青霉素；HindⅢ和BamHⅠ；將 T‐DNA 之間的DNA序列轉移并整合至受體細胞的染色體DNA上
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：15引用：3難度：0.7
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6