1．人呼吸道合胞病毒（Human Respiratory syncytial virus,HRSV）是一種單鏈RNA病毒，如圖1是構(gòu)建人呼吸道合胞病毒基因組載體的示意圖，相關(guān)限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)為：BclⅠ（T↓GATCA）、EcoRⅠ（G↓AATTC）、XbaⅠ（T↓CTAGA）、Sau3AⅠ（↓GATC）、BamHⅠ（G↓GATCC），請(qǐng)據(jù)圖回答：
?
（1）HRSV的基因組為-RNA，入侵細(xì)胞后在
的催化下合成+RNA。被HRSV侵染的人體組織中易觀察到“多核細(xì)胞”的現(xiàn)象，請(qǐng)解釋此現(xiàn)象的可能成因
。此現(xiàn)象被科學(xué)家發(fā)現(xiàn)并應(yīng)用于
（技術(shù)）。
（2）在RT-PCR中添加的某逆轉(zhuǎn)錄酶能實(shí)現(xiàn)從單鏈RNA到雙鏈cDNA的合成過(guò)程，試推測(cè)該逆轉(zhuǎn)錄酶具有
（①依賴于RNA的DNA聚合酶活性②RNaseH（RNA酶）活性③依賴于DNA的DNA聚合酶活性）等多種活性。HIV的逆轉(zhuǎn)錄酶還有DNA內(nèi)切酶活性，試推測(cè)這可能與HIV侵染后
（生理過(guò)程）有關(guān)。
（3）過(guò)程③需要用
兩種酶切割質(zhì)粒A。過(guò)程②設(shè)計(jì)引物時(shí)在兩種引物的5'端分別添加
兩種酶的識(shí)別序列，酶切位點(diǎn)一般不能添加在引物的3'端的主要原因是
。
（4）為制備減毒突變株，科研人員將單個(gè)突變堿基引入HRSV基因組cDNA質(zhì)?？寺≈?，流程如圖2。已知在細(xì)菌體內(nèi)合成的DNA分子有甲基化修飾，通過(guò)PCR擴(kuò)增的DNA鏈無(wú)甲基化修飾。
①DpnI識(shí)別甲基化的GATC四個(gè)堿基序列，因此其能將圖中的
鏈水解消化掉，以留下帶突變堿基DNA鏈，其上缺刻（縫隙）在大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)完成的修復(fù)需要
酶。
②若已知質(zhì)粒B為a個(gè)，經(jīng)過(guò)程①擴(kuò)增15個(gè)循環(huán)，需要突變引物
個(gè)，將過(guò)程②形成的產(chǎn)物全部轉(zhuǎn)入大腸桿菌后復(fù)制n輪，得到雙鏈突變的DNA
個(gè)。
