棉鈴蟲(chóng)和蚜蟲(chóng)是常見(jiàn)的植物害蟲(chóng)，Cry1A基因的表達(dá)產(chǎn)物對(duì)棉鈴蟲(chóng)等鱗翅目昆蟲(chóng)有較強(qiáng)的毒性，GNA基因的表達(dá)產(chǎn)物對(duì)蚜蟲(chóng)等刺吸式口器的昆蟲(chóng)有較強(qiáng)的毒性。科研人員將Cry1A基因與GNA基因連接在一起，構(gòu)建了雙抗蟲(chóng)基因的重組表達(dá)載體，并轉(zhuǎn)入煙草細(xì)胞，獲得了具有雙抗性的轉(zhuǎn)基因煙草，其部分過(guò)程如圖1所示，請(qǐng)分析并回答以下問(wèn)題：

注：Klenow能將黏性末端轉(zhuǎn)變?yōu)槠侥┒?；圖中不同限制酶切出的黏性末端均不同。
（1）過(guò)程③將Cry1A基因與GNA基因相連，可選用

T₄DNA連接酶

T₄DNA連接酶

（“E?coliDNA連接酶”或“T₄DNA連接酶”）。
（2）過(guò)程④應(yīng)該選用

EcoRⅠ和HindⅢ

EcoRⅠ和HindⅢ

（填圖中限制酶）切割植物表達(dá)載體，以便和目的基因相連，形成重組表達(dá)載體。
（3）將重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌之前，一般先用

Ca²⁺

Ca²⁺

處理農(nóng)桿菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞。
（4）讓農(nóng)桿菌侵染煙草葉片前，需要通過(guò)實(shí)驗(yàn)篩選農(nóng)桿菌：將培養(yǎng)農(nóng)桿菌的培養(yǎng)基倒平板后均分為A、B兩組，在A組培養(yǎng)基中涂布一定量的鏈霉素，在B組培養(yǎng)基中涂布等量的卡那霉素和鏈霉素。往A組培養(yǎng)基中接種適量農(nóng)桿菌，待長(zhǎng)出菌落后，用影印法接種到B組培養(yǎng)基上，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2，其中

1、3

1、3

（填圖中對(duì)應(yīng)的數(shù)字）菌落對(duì)應(yīng)的農(nóng)桿菌可能是符合要求的，即含有

重組表達(dá)載體

重組表達(dá)載體

的農(nóng)桿菌。
（5）通過(guò)植物組織培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)農(nóng)桿菌侵染的煙草葉片，獲得煙草幼苗。欲從個(gè)體水平檢測(cè)這些植株是否成功導(dǎo)入目的基因，方法是

將適量的棉鈴蟲(chóng)和蚜蟲(chóng)接種到轉(zhuǎn)基因植株上，觀察是否抗蟲(chóng)

將適量的棉鈴蟲(chóng)和蚜蟲(chóng)接種到轉(zhuǎn)基因植株上，觀察是否抗蟲(chóng)

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