1977年,曾經(jīng)兩度獲得諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)的生物化學(xué)家Sanger等人建立一種DNA測(cè)序方法——雙脫氧鏈末端終止法。其原理是利用四種2',3'雙脫氧核營(yíng)三磷酸(ddNTP)代替部分脫氧核苷三磷酸(dNTP)作底物參與DNA的合成。每一次序列測(cè)定由一套四個(gè)單獨(dú)的反應(yīng)構(gòu)成,每個(gè)反應(yīng)含有所有四種脫氧核苷三磷酸(dNTP),并混入限量的一種不同的雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP)。例如:添加了腺嘌呤雙脫氧核苷三磷酸(ddATP)的反應(yīng)體系中,DNA子鏈延伸時(shí)ddATP缺乏所需要的3'-OH基團(tuán),該核苷酸鏈在模板鏈為T處終止。這套四個(gè)反應(yīng)體系得到的所有片段具有共同的起始點(diǎn),但終止在不同種的核苷酸上,對(duì)這些大小不同的片段進(jìn)行檢測(cè)從而分析得到DNA片段的序列(如下圖所示)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題:
(1)示意圖的體外反應(yīng)體系中需用高溫解開DNA分子的雙鏈,細(xì)胞內(nèi)無(wú)法實(shí)現(xiàn)高溫,是在 解旋解旋酶的作用下實(shí)現(xiàn)解鏈的。反應(yīng)體系DNA復(fù)制過(guò)程中遵循 堿基互補(bǔ)配對(duì)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則,利用 DNA聚合DNA聚合酶使子鏈不停延伸。下圖左左(填“左”或“右”)為ddNTP,因?yàn)槠涿撗鹾颂堑?'位置缺少 —OH或羥基—OH或羥基,故不能與后續(xù)的dNTP形成化學(xué)鍵導(dǎo)致子鏈合成終止。
(2)圖1、2表示利用該方法測(cè)出的兩個(gè)DNA片段的一條鏈的堿基排列順序。
據(jù)圖1推測(cè),此DNA片段上的鳥嘌呤脫氧核苷酸的數(shù)量是 77個(gè)。圖2顯示的脫氧核苷酸鏈堿基序列為 AGCAGTAGTATGCATAGCAGTAGTATGCAT(從上往下序列)。兩個(gè)DNA片段得到了不同的檢測(cè)結(jié)果說(shuō)明DNA分子具有 特異(或多樣)特異(或多樣)性。圖中所測(cè)定的兩個(gè)DNA片段堿基總數(shù)不同,但其中(A+G)(T+C)總是=11。
(3)對(duì)于某些病毒,比如人類免疫缺陷病病毒、流感病毒等,基因是有遺傳效應(yīng)的 RNA片段RNA片段。
(
A
+
G
)
(
T
+
C
)
【答案】解旋;堿基互補(bǔ)配對(duì);DNA聚合;左;—OH或羥基;7;AGCAGTAGTATGCAT;特異(或多樣);1;RNA片段
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布:2024/4/20 14:35:0組卷:12引用:1難度:0.6
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