我國(guó)是世界產(chǎn)棉大國(guó)，棉花產(chǎn)量占世界總產(chǎn)量的1/4。但是棉花病蟲害非常多，尤其是蟲害，直接影響了棉花的產(chǎn)量。轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的研發(fā)成功，為棉花的增收做出了巨大的貢獻(xiàn)?；卮鹣铝袉栴}：
（1）轉(zhuǎn)基因抗蟲棉所需的殺蟲基因，可用PCR技術(shù)大量擴(kuò)增。擴(kuò)增過(guò)程中需要將溫度冷卻至55～60℃，目的是

降溫使兩種引物通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則與兩條單鏈DNA結(jié)合

降溫使兩種引物通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則與兩條單鏈DNA結(jié)合

。獲得大量殺蟲基因后，還需利用兩種酶構(gòu)建基因表達(dá)載體。為了使殺蟲基因和質(zhì)粒能正確地成功拼接，一般操作方法是

準(zhǔn)備兩種不同的限制酶，對(duì)殺蟲基因所在DNA片段和質(zhì)粒均進(jìn)行雙酶切，再使用DNA連接酶將殺蟲基因和質(zhì)粒連接起來(lái)

準(zhǔn)備兩種不同的限制酶，對(duì)殺蟲基因所在DNA片段和質(zhì)粒均進(jìn)行雙酶切，再使用DNA連接酶將殺蟲基因和質(zhì)粒連接起來(lái)

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（2）將殺蟲基因?qū)朊藁?xì)胞有多種方法，我國(guó)獨(dú)創(chuàng)的方法是

花粉管通道法

花粉管通道法

，另外還可以利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法讓另殺蟲基因的遺傳特性在棉花細(xì)胞里得以穩(wěn)定維持和表達(dá)，理由是

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法使Ti質(zhì)粒上插入了殺蟲基因的的T-DNA整合到棉花細(xì)胞的染色體DNA上

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法使Ti質(zhì)粒上插入了殺蟲基因的的T-DNA整合到棉花細(xì)胞的染色體DNA上

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（3）殺蟲基因?qū)朊藁?xì)胞后，可利用放射性同位素標(biāo)記的目的基因的DNA片段作為

基因探針

基因探針

，目的是檢測(cè)

目的基因是否成功導(dǎo)入受體細(xì)胞

目的基因是否成功導(dǎo)入受體細(xì)胞

。若是利用抗原一抗體雜交技術(shù)，結(jié)果顯示出雜交帶，則說(shuō)明

殺蟲基因在棉花細(xì)胞中成功表達(dá)出對(duì)應(yīng)蛋白質(zhì)

殺蟲基因在棉花細(xì)胞中成功表達(dá)出對(duì)應(yīng)蛋白質(zhì)

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（4）除了上述的分子檢測(cè)外，有時(shí)還需要進(jìn)行個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定。簡(jiǎn)述在個(gè)體水平鑒定殺蟲基因是否成功表達(dá)的實(shí)驗(yàn)思路：

讓害蟲分別吞食轉(zhuǎn)基因棉花和普通棉花的葉片，觀察害蟲的存活情況，如果普通棉花組害蟲存活，轉(zhuǎn)基因棉花組害蟲死亡，則說(shuō)明殺蟲基因成功表達(dá)，若轉(zhuǎn)基因棉花組害蟲不死亡，則說(shuō)明殺蟲基因沒有成功表達(dá)

讓害蟲分別吞食轉(zhuǎn)基因棉花和普通棉花的葉片，觀察害蟲的存活情況，如果普通棉花組害蟲存活，轉(zhuǎn)基因棉花組害蟲死亡，則說(shuō)明殺蟲基因成功表達(dá)，若轉(zhuǎn)基因棉花組害蟲不死亡，則說(shuō)明殺蟲基因沒有成功表達(dá)

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