在真核生物體內(nèi)普遍存在一種針對(duì)外源RNA的RNA沉默機(jī)制來抵御病毒的入侵，其過程主要包括：真核細(xì)胞能識(shí)別入侵病毒的RNA使其成為雙鏈RNA，經(jīng)剪切加工后，來自雙鏈RNA中的一些單鏈RNA片段（siRNA）與其他蛋白質(zhì)形成RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合體（RISC），該復(fù)合體可以特異性地與病毒RNA結(jié)合并將其降解。番木瓜是嶺南四大名果之一，由于其極易受單鏈RNA的環(huán)斑病毒侵染從而導(dǎo)致減產(chǎn)。研究人員將環(huán)斑病毒（HA株系）的衣殼蛋白基因?qū)敕竟嫌鷤M織內(nèi)，獲得了首個(gè)轉(zhuǎn)基因抗病毒品種R?；卮鹣铝袉栴}。
（1）在獲取環(huán)斑病毒衣殼蛋白基因的過程中，研究人員需要從序列數(shù)據(jù)庫中獲取環(huán)斑病毒的衣殼蛋白基因序列信息，根據(jù)衣殼蛋白基因兩側(cè)保守區(qū)域設(shè)計(jì)出用于PCR反應(yīng)的

引物

引物

。然后從環(huán)斑病毒中提取總RNA，經(jīng)

逆轉(zhuǎn)錄

逆轉(zhuǎn)錄

后得到DNA，作為PCR反應(yīng)的

模板DNA

模板DNA

，最后用

瓊脂糖凝膠電泳

瓊脂糖凝膠電泳

方法鑒定PCR產(chǎn)物。
（2）當(dāng)轉(zhuǎn)基因抗病毒品種R被環(huán)斑病毒促染后，相關(guān)的siRNA通過

堿基互補(bǔ)配對(duì)

堿基互補(bǔ)配對(duì)

原則與病毒RNA結(jié)合，經(jīng)過

誘導(dǎo)沉默復(fù)合體（RISC）

誘導(dǎo)沉默復(fù)合體（RISC）

對(duì)RNA的降解，抑制病毒增殖。
（3）品種R對(duì)HA株系的環(huán)斑病毒具有良好的抗性，但對(duì)我國華南地區(qū)的其他株系的環(huán)斑病毒抗性不強(qiáng)。導(dǎo)入環(huán)斑病毒（HA株系）基因y的品種Y對(duì)不同株系環(huán)斑病毒具有更廣譜的抗性。推測與衣殼蛋白基因相比，基因y

堿基序列更加保守（即不同病毒株系的y基因序列相同），作為目的基因?qū)敕竟虾?，具有廣泛的病毒株系抗性

堿基序列更加保守（即不同病毒株系的y基因序列相同），作為目的基因?qū)敕竟虾?，具有廣泛的病毒株系抗性

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