PHB2蛋白具有抑制細胞增殖的作用。為初步探究某動物PHB2蛋白抑制人宮頸癌細胞增殖的原因,研究者從基因數(shù)據(jù)庫中獲取了該蛋白的基因編碼序列(簡稱phb2基因),大小為0.9kb(1kb=1000堿基對),利用大腸桿菌表達該蛋白。請回答下列問題:
相關(guān)限制酶的識別序列及切割位點(注:箭頭表示切割位點)
名稱 | 識別序列及切割位點 | 名稱 | 識別序列及切割位點 |
HindⅢ | A↓AGCTT TTCGA↑A |
EcoRⅠ | G↓AATTC CTTAA↑G |
PvitⅡ | CAG↓CTG GTC↑GAC |
PstⅠ | CTGC↓AG GA↑CGTC |
KpnⅠ | G↓GTACC CCATG↑G |
BamHⅠ | G↓GATCC CCTAG↑G |
逆轉(zhuǎn)錄酶和DNA聚合酶
逆轉(zhuǎn)錄酶和DNA聚合酶
。(2)圖1為所用載體圖譜示意圖,圖中限制酶的識別序列及切割位點見表。為使phb2基因(該基因序列不含圖1中限制酶的識別序列)與載體正確連接,在擴增的phb2基因兩端需添加
ECORⅠ
ECORⅠ
和 Pvit II
Pvit II
兩種限制酶的識別序列。雙酶切避免了目的基因與載體的 反向
反向
連接,同時減少目的基因與目的基因、載體與載體的連接,以提高重組質(zhì)粒的比例。經(jīng)過這兩種酶酶切的phb2基因和載體進行連接時,需使用的酶是 DNA連接酶
DNA連接酶
。(3)轉(zhuǎn)化前需用CaCl2處理大腸桿菌細胞,使其處于
感受
感受
態(tài)的生理狀態(tài),以提高轉(zhuǎn)化效率。(4)將轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌接種在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng),隨機挑取菌落(分別編號為1、2、3、4)培養(yǎng)并提取質(zhì)粒,用(2)中選用的兩種限制酶進行酶切,酶切產(chǎn)物經(jīng)電泳分離,結(jié)果如圖2,
3
3
號菌落的質(zhì)粒很可能是含目的基因的重組質(zhì)粒。(5)將純化得到的PHB2蛋白以一定濃度添加到人宮頸癌細胞培養(yǎng)液中,培養(yǎng)24小時后,檢測處于細胞周期(圖3)不同時期的細胞數(shù)量,統(tǒng)計結(jié)果如圖4。分析該蛋白抑制人宮頸癌細胞增殖可能的原因是:將細胞阻滯在細胞周期的
G2/M
G2/M
(填“G1”或“S”或“G2/M”)期。【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】逆轉(zhuǎn)錄酶和DNA聚合酶;ECORⅠ;Pvit II;反向;DNA連接酶;感受;3;G2/M
【解答】
【點評】
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發(fā)布:2024/11/13 20:30:2組卷:23引用:3難度:0.6
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3.如表為5種限制酶的識別序列及切割位點,如圖為某種質(zhì)粒和目的基因,箭頭所指為限制酶酶切位點。現(xiàn)要將圖中的目的基因定向插入到質(zhì)粒中,以制備轉(zhuǎn)基因植株。下列說法正確的是( )
限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅠ NbeⅠ MunⅠ 識別序列及切割位點 G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG 發(fā)布:2024/12/20 3:30:1組卷:6引用:1難度:0.6
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