In-Fusion技術是一項新型的無縫克隆技術。該技術關鍵是要在目的基因兩端構建與線性化質粒末端相同的DNA序列（即同源序列，通常為15-20bp），然后用In-Fusion酶處理即可實現(xiàn)無縫連接。它的操作步驟大致為：①利用PCR技術將質粒線性化；
②PCR擴增出兩端含線性化質粒同源序列的目的基因；
③目的基因與線性化質粒同源區(qū)域在In-Fusion酶作用下形成重組質粒；
④將重組質粒導入受體細胞。
回答下列問題。
（1）過程①需要用到的酶是 耐高溫的DNA聚合酶耐高溫的DNA聚合酶。過程③中，同源序列1與同源序列2中的堿基序列不同，這樣設計的好處是 防止目的基因反向連接，防止線性化質粒或目的基因自身環(huán)化防止目的基因反向連接，防止線性化質?；蚰康幕蜃陨憝h(huán)化。
（2）為保證擴增出兩端含線性化質粒同源序列的目的基因，引物A或引物B要依據(jù) 目的基因與質粒目的基因與質粒序列進行設計。
（3）若目的基因是氨芐青霉素抗性基因，以大腸桿菌作為受體細胞。為檢測已轉化大腸桿菌的抗性效果，在含有氨芐青霉素和不含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上分別接種等量的已轉化大腸桿菌并培養(yǎng)相同時間，然后采用 稀釋涂布平板稀釋涂布平板法進行計數(shù)，若結果較真實值偏小，原因是 當兩個或多個細胞連在一起時，在平板上觀察到的是一個菌落當兩個或多個細胞連在一起時，在平板上觀察到的是一個菌落。
（4）與傳統(tǒng)構建重組質粒的方法相比，In-Fusion技術的優(yōu)勢有 不受限制酶酶切位點的限制；可以把目的基因插入任何位點；避免限制酶切割對質粒功能區(qū)的破壞不受限制酶酶切位點的限制；可以把目的基因插入任何位點；避免限制酶切割對質粒功能區(qū)的破壞。（至少答出兩點）
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】耐高溫的DNA聚合酶；防止目的基因反向連接，防止線性化質?；蚰康幕蜃陨憝h(huán)化；目的基因與質粒；稀釋涂布平板；當兩個或多個細胞連在一起時，在平板上觀察到的是一個菌落；不受限制酶酶切位點的限制；可以把目的基因插入任何位點；避免限制酶切割對質粒功能區(qū)的破壞
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/8/9 8:0:9組卷：6引用：2難度：0.6
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
3．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7