為探究Bcl-2相關(guān)抗凋亡蛋白3（BAG3）在細(xì)胞自噬中的作用，科研人員計劃從質(zhì)粒A中獲取BAG3基因，將其接入質(zhì)粒pGEX-4T1，然后在宿主細(xì)胞內(nèi)表達(dá)目標(biāo)蛋白，用于后續(xù)研究。請回答下列問題：
（1）BAG3的基因序列如圖2所示。由于BAC3基因兩側(cè)沒有合適的酶切位點，并確定內(nèi)部不含有EcoRI、XhoI限制酶的識別序列。在設(shè)計引物時，需將引物與限制酶的識別序列相連，以便將目的基因與載體相連。設(shè)計出的引物是 ADAD。
A．引物5'-TTGAATTCATGAGCGCCGCCACCCACTC-3'
B．引物5'-TTGAATTCTACTCGCGGCGGTGGGTGAG-3'
C．引物5'-TAGAGCTCCGGTGCTGCTGGGTTACCAC-3'
D．引物5'-TACTCGAGCGGTGCTGCTGGGTTACCAG-3'
（2）合成引物后，以 質(zhì)粒A質(zhì)粒A為模板進(jìn)行PCR，為了確認(rèn)是否擴(kuò)增出了目的基因，可對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行 電泳電泳，取出凝膠置于紫外燈下觀察照相，與DNAmarker（標(biāo)準(zhǔn)參照物）進(jìn)行對比，切下含目的基因片段的瓊脂糖凝膠，通過試劑盒回收目的基因。
（3）用雙酶切法分別處理回收的目的基因和pCEX-4TI質(zhì)粒，為了提高目的基因與表達(dá)質(zhì)粒的連接效率，需要排除 酶切后的非目標(biāo)片段酶切后的非目標(biāo)片段的干擾。
（4）用 Ca2+Ca2+處理大腸桿菌細(xì)胞，使其處于一種能 吸收周圍環(huán)境中DNA分子吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，將構(gòu)建好的重組質(zhì)粒導(dǎo)入其中。為了篩選出工程菌，以便后期提取質(zhì)粒，檢測是否含有目的基因片段，請寫出工程菌的純培養(yǎng)過程。 在含有氨芐青霉素的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，挑取單菌落接種到液體培養(yǎng)基中擴(kuò)增培養(yǎng)在含有氨芐青霉素的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，挑取單菌落接種到液體培養(yǎng)基中擴(kuò)增培養(yǎng)。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】AD；質(zhì)粒A；電泳；酶切后的非目標(biāo)片段；Ca2+；吸收周圍環(huán)境中DNA分子；在含有氨芐青霉素的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，挑取單菌落接種到液體培養(yǎng)基中擴(kuò)增培養(yǎng)
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/7/7 8:0:9組卷：36引用：5難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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