家畜胚胎的性別鑒定技術對畜牧業(yè)的發(fā)展具有重要意義。巢式PCR擴增反應在兩次PCR反應中使用兩組不同引物，先使用外引物對目標區(qū)域DNA片段進行第一次PCR擴增，產(chǎn)生中間產(chǎn)物，然后使用內(nèi)引物對中間產(chǎn)物進行第二次PCR擴增，產(chǎn)生目標產(chǎn)物。如圖1是式PCR工作原理示意圖，請回答：
（1）巢式PCR反應體系中需要加入模板、DNA聚合酶DNA聚合酶、dNTP（原料）dNTP（原料）、引物、Mg2+、緩沖液等。
（2）相比于常規(guī)PCR獲得的產(chǎn)物而言，巢式PCR獲得的產(chǎn)物特異性 更強更強，原因是如果利用外引物擴增產(chǎn)生了錯誤片段，再利用內(nèi)引物擴增在錯誤片段上進行引物配對并擴增的概率 升高升高。
（3）巢式PCR通常在一個試管中進行第一階段反應，然后將中間產(chǎn)物等轉移到第二試管中進行第二階段反應，不在同一試管完成的主要原因是 防止引物配對特異性不強造成的非特異性擴增的污染防止引物配對特異性不強造成的非特異性擴增的污染。
（4）科研人員利用多重巢式PCR技術同時擴增Y染色體上雄性決定基因（SRY）和常染色體上的酪蛋白基因（CSN1S1），進行早期胚胎的性別鑒定，并將鑒定后的胚胎進行移植。表是主要實驗步驟，請完成表：
| 實驗目的 | 方法步驟要點 |
| 胚胎樣品DNA提取 | 選取囊胚的① 滋養(yǎng)層 滋養(yǎng)層 細胞提取DNA |
| PCR引物的設計和合成 | 根據(jù)牛的SRY和CSN1S1基因序列設計合成② 2 2 對引物 |
| PCR過程 | 預變性→③ 變性 變性 →退火→延伸 |
| 觀察擴增結果 | 電泳分析 |
| 受體牛④ 同期發(fā)情 同期發(fā)情 處理 |
對受體牛注射前列腺素 |
| 胚胎移植 | 將篩選出的胚胎移植到受體牛的子宮內(nèi) |
A
A
?？梢源_定1～5號中 1，2，4
1，2，4
號胚胎為雌性。（6）牛胚胎性別的鑒定除了可以利用PCR外，下列方法也可行的有
②③④
②③④
。①差速離心法
②核酸探針雜交法
③染色體核型分析法
④H-Y抗血清免疫學法（H-Y抗原編碼基因位于Y染色體上）
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】DNA聚合酶；dNTP（原料）；更強；升高；防止引物配對特異性不強造成的非特異性擴增的污染；滋養(yǎng)層；2；變性；同期發(fā)情；A；1，2，4；②③④
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：33引用：2難度：0.6
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1．科研人員克隆了豬白細胞抗原基因（SLA-2基因），構建了該基因的真核表達載體，進行了豬腎上皮細胞表達研究。實驗的主要流程如圖1，SLA-2基因長度為1100bp,質粒B的總長度為4445bp,其限制酶切點后的數(shù)字表示距復制原點的距離。請回答：
（1）過程①中，PCR擴增SLA-2的原理是限制酶 BclⅠ NotⅠ XbaⅠ San3AⅠ 識別序列及切割位點 T↓GATCA GC↓GGCCGC T↓CTAGA ↓GATC ，下列4種引物中應選擇的是。
a 5'-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
b 5'-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
c 5'-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
d 5'-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
（2）過程②將重組質粒導入大腸桿菌的目的是，該過程需要用處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細胞。然后將大腸桿菌涂布在含有（抗生素）的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。
（3）若用Sau3AⅠ和XbaⅠ完全酶切質粒C后電泳，請在答題紙相應位置畫出可能得到的電泳條帶。
（4）科研中常用呤霉素對真核細胞進行篩選，一般選擇最低致死濃度的前一個濃度作為篩選濃度的原因是：既可以讓大部分沒有抗性的細胞死亡又不會讓。實驗結果如圖2，根據(jù)實驗結果最佳的嘌霉素篩選濃度為。
（5）過程⑦研究人員用小鼠抗SLA抗原肽單克隆抗體檢測腎上皮細胞生產(chǎn)的抗原肽，其原理是，單克隆抗體能檢測其是否具有正確的，從而是否具有生物活性。
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：41引用：3難度：0.6 -
2．以下是有關分離與鑒別DNA的技術，其中說法正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/15 16:30:6組卷：5引用：1難度：0.5 -
3．下列關于“DNA片段的擴增及電泳鑒定”的實驗，說法錯誤的是（ ）
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：3引用：1難度：0.6
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