R-7是家蠶體內的一種小分子非編碼RNA,可與某些mRNA尾端的一段非編碼序列(3'-UTR)結合,進而影響基因的表達。為研究R-7是否影響家蠶基因B(調控家蠶眼睛發(fā)育)的表達,科研人員將基因B中對應3'-UTR的DNA片段與熒光素酶基因(R-7不影響熒光素酶基因的表達)重組,如圖1所示。將該重組載體導入家蠶胚胎細胞并檢測其表達情況,結果如圖2所示。請回答下列問題:
(1)要想短時間內獲得大量目的基因,需要用到的技術是
PCR擴增技術
PCR擴增技術
,該技術的原理是 DNA復制
DNA復制
。
(2)圖1中對應3'-UTR的DNA片段應插入到位點 2
2
,原因是 目的基因應插入到啟動子與終止子之間,且不能破壞熒光素酶基因
目的基因應插入到啟動子與終止子之間,且不能破壞熒光素酶基因
。基因工程的核心步驟是 基因表達載體的構建
基因表達載體的構建
、
(3)科研人員從圖②所示的實驗組和對照組細胞中提取蛋白質,經(jīng)處理檢測后獲得相對熒光值(在適宜條件下,熒光素酶可催化熒光素發(fā)生氧化反應并發(fā)出熒光)。實驗組為將重組載體導入含R-7的家蠶胚胎細胞中,對照組1為將含有熒光素酶基因的表達載體(不含對應3'-UTR的DNA片段)導入含R一7的家蠶胚胎細胞中,則對照組2應為 將重組載體導入不含(或去除)R-7的家蠶胚胎細胞中
將重組載體導入不含(或去除)R-7的家蠶胚胎細胞中
。由結果推知R-7通過 與基因B所轉錄的mRNA的3'-UTR結合
與基因B所轉錄的mRNA的3'-UTR結合
進而抑制基因B的表達。