科學(xué)家將魚(yú)抗凍蛋白基因轉(zhuǎn)入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相對(duì)寒冷的環(huán)境中生長(zhǎng)。質(zhì)粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四種限制酶切割位點(diǎn)，如圖是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過(guò)程的示意圖（amp^r為抗氨芐青霉素基因），其中①～④是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過(guò)程中的相關(guān)步驟，Ⅰ、Ⅱ表示相關(guān)結(jié)構(gòu)或細(xì)胞。請(qǐng)據(jù)圖作答：

（1）在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，可用一種或者多種限制酶進(jìn)行切割。為了避免目的基因和載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，在此實(shí)例中，應(yīng)該選用限制酶

PstⅠ

PstⅠ

、

SmaⅠ

SmaⅠ

分別對(duì)

魚(yú)抗凍蛋白基因的DNA、

魚(yú)抗凍蛋白基因的DNA、

、

質(zhì)粒

質(zhì)粒

進(jìn)行切割，切割后產(chǎn)生的DNA片段分別為

4

4

種、

2

2

種。
（2）培養(yǎng)基中的氨芐青霉素會(huì)抑制番茄愈傷組織細(xì)胞的生長(zhǎng)，要利用該培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入含魚(yú)的抗凍蛋白基因的番茄細(xì)胞，應(yīng)使基因表達(dá)載體I中含有

抗氨芐青霉素基因（amp^r）

抗氨芐青霉素基因（amp^r）

作為標(biāo)記基因。
（3）利用組織培養(yǎng)技術(shù)將導(dǎo)入含魚(yú)的抗凍蛋白基因的番茄組織細(xì)胞培育成植株。圖中③、④依次表示組織培養(yǎng)過(guò)程中番茄組織細(xì)胞的

脫分化、再分化

脫分化、再分化

過(guò)程。