圖中甲表示含目的基因的DNA片段，圖乙表示質粒（已知PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ三種限制酶切割后產(chǎn)生的黏性末端都不相同）。請回答下列問題：
（1）已知DNA的合成方向總是從子鏈的5′端向3′端延伸。利用PCR技術以圖甲中的DNA片段為模板擴增目的基因，需要的引物有 B、CB、C（從A、B、C、D四種單鏈DNA片段中選擇）。利用PCR擴增目的基因的過程由高溫變性（0～95℃），低溫復性（55～60℃），適溫延伸（70～75℃）三個步驟構成一個循環(huán)，為使得DNA聚合酶能夠重復利用，選用的酶應在 90～9590～95℃處理后仍然具備催化活性。
（2）要保證目的基因能與圖乙中的質粒準接，要將（1）中選出的兩種引物的5′端分別添加 PstⅠPstⅠ和 EcoRⅠEcoRⅠ兩種限制酶的識別序列。在此基礎上，對擴增的目的基因和質粒都用這兩種限制酶處理，待基因表達載體構建完成后，加入含大腸桿菌的轉化液中。要從中分離出含該重組質粒的大腸桿菌單菌落，請簡述操作思路：將轉化液接種在加入四環(huán)素的固體培養(yǎng)基上，在適宜條件下培養(yǎng)一段時間后，觀察是否有菌落生長將轉化液接種在加入四環(huán)素的固體培養(yǎng)基上，在適宜條件下培養(yǎng)一段時間后，觀察是否有菌落生長。
（3）從DNA分子結構分析，上述操作用到的工具酶包括 限制酶限制酶和 DNA連接酶DNA連接酶，其作用的共同點是都可以作用于DNA分子的 磷酸二酯磷酸二酯鍵。
（4）若要將重組質粒導入大腸桿菌，則一般先要用Ca2+處理大腸桿菌，目的是使大腸桿菌處于一種 吸收周圍環(huán)境中DNA分子吸收周圍環(huán)境中DNA分子生理狀態(tài)。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】B、C；90～95；PstⅠ；EcoRⅠ；將轉化液接種在加入四環(huán)素的固體培養(yǎng)基上，在適宜條件下培養(yǎng)一段時間后，觀察是否有菌落生長；限制酶；DNA連接酶；磷酸二酯；吸收周圍環(huán)境中DNA分子
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：29引用：2難度：0.6
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6