Ⅰ型糖尿病是因免疫系統(tǒng)將自身胰島素作為抗原識別而引起的自身免疫病。小腸黏膜長期少量吸收胰島素抗原，能誘導(dǎo)免疫系統(tǒng)識別該抗原后應(yīng)答減弱，從而緩解癥狀?？蒲腥藛T利用Ⅰ型糖尿病模型小鼠進行動物實驗，使乳酸菌在小鼠腸道內(nèi)持續(xù)產(chǎn)生人胰島素抗原，為此構(gòu)建重組表達載體，技術(shù)路線如圖1。

據(jù)圖回答：
（1）為使人胰島素在乳酸菌中高效表達，需改造其編碼序列。圖2是改造前后人胰島素B鏈編碼序列的起始30個核苷酸序列。據(jù)圖分析，轉(zhuǎn)錄形成的mRNA中，該段序列所對應(yīng)的片段內(nèi)存在堿基替換的密碼子數(shù)有

6

6

個。
（2）在人胰島素A、B肽鏈編碼序列間引入一段短肽編碼序列，確保等比例表達A、B肽鏈。下列有關(guān)分析正確的是

ABCD

ABCD

。
A．引入短肽編碼序列不能含終止子序列
B．引入短肽編碼序列不能含終止密碼子編碼序列
C．引入短肽不能改變A鏈氨基酸序列
D．引入短肽不能改變原人胰島素抗原性
（3）在重組表達載體中，SacⅠ和XbaⅠ限制酶僅有圖示的酶切位點。用這兩種酶充分酶切重組表達載體，可形成

3

3

種DNA片段。質(zhì)粒載體作為基因工程的工具，應(yīng)具備的基本條件有

①自我復(fù)制；②帶有特殊的標(biāo)記基因③具有一個至多個限制酶切點

①自我復(fù)制；②帶有特殊的標(biāo)記基因③具有一個至多個限制酶切點

（答出兩點即可）
（4）檢測轉(zhuǎn)化的乳酸菌發(fā)現(xiàn)，信號肽—重組人胰島素分布在細胞壁上。由此推測，信號肽的合成和運輸所經(jīng)歷的細胞結(jié)構(gòu)依次是

核糖體、細胞質(zhì)基質(zhì)、細胞膜、細胞壁

核糖體、細胞質(zhì)基質(zhì)、細胞膜、細胞壁

。
（5）Ⅰ型糖尿病也可以通過核移植技術(shù)進行治療。目前核移植技術(shù)中普遍使用的去核方法是

顯微操作

顯微操作

法，還有人采用梯度離心，紫外光短時間照射、化學(xué)物質(zhì)處理等方法，這些方法是在沒有刺破透明帶或卵母細胞質(zhì)膜的情況下，去除細胞核或使卵細胞核

DNA變性

DNA變性

，從而達到去核的目的。