羊絨素有“軟黃金”之稱，內(nèi)蒙古絨山羊和遼寧絨山羊是我國(guó)的兩大產(chǎn)絨品種．我國(guó)生物學(xué)家運(yùn)用現(xiàn)代生物技術(shù)培育出了轉(zhuǎn)基因絨山羊．其過(guò)程如圖1所示：
（1）在遼寧絨山羊細(xì)胞中獲取的IGF 一I基因在導(dǎo)入胚胎干細(xì)胞之前須
構(gòu)建基因表達(dá)載體
構(gòu)建基因表達(dá)載體
，這是基因工程操作的核心步驟，若該過(guò)程使用的質(zhì)粒是雙鏈閉合環(huán)狀的DNA分子，用兩種識(shí)別序列不同的限制酶M和N切割（識(shí)別序列和切割位點(diǎn)如圖2），通過(guò)凝電泳分離分析得下表．
| 使用限制酶 |
酶切結(jié)果（單位：Kb） |
| 酶M |
1.0、5.0、10.0 |
| 酶M+酶N |
1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 |
（2）①在該質(zhì)粒中，N酶的切割位點(diǎn)有
2
2
個(gè)．
②M酶與N酶切出的能相互粘連的末端在酶的作用下相互連接，連接后的序列是否能用M酶、N酶進(jìn)行切割？
不能
不能
（填“能”或“不能”）．
（3）胚胎干細(xì)胞（ES）可由囊胚的
內(nèi)細(xì)胞團(tuán)
內(nèi)細(xì)胞團(tuán)
有分離培養(yǎng)獲得．轉(zhuǎn)基因胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中應(yīng)定期
更換培養(yǎng)液
更換培養(yǎng)液
，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞自身造成危害．
（4）干細(xì)胞經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)誘導(dǎo)分化為早期胚胎，隨后即可植入經(jīng)
同期發(fā)情
同期發(fā)情
處理的代孕母羊體內(nèi)．
