異丁醇具有燃值高、能量密度高等優(yōu)點(diǎn)，其開發(fā)和利用對(duì)優(yōu)化我國能源結(jié)構(gòu)和保護(hù)環(huán)境有非常重要的戰(zhàn)略意義?；卺劸平湍傅陌l(fā)酵途徑（圖甲）和圖乙的質(zhì)粒，研究者構(gòu)建了一種表達(dá)載體pUC18，用于過表達(dá)ILV2、ILV5、ILV3、AR010基因，以實(shí)現(xiàn)異丁醇的大規(guī)模生產(chǎn)。已知氨芐青霉素能抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的形成。據(jù)此回答下列問題：
（1）圖乙質(zhì)粒上有多個(gè)限制酶切位點(diǎn)，作用是 便于插入外源（基因）DNA片段便于插入外源（基因）DNA片段。研究人員先用pUC18轉(zhuǎn)化經(jīng) Ca2+處理Ca2+處理處理的大腸桿菌，以便篩選、鑒定擴(kuò)增重組質(zhì)粒。重組質(zhì)粒上有 原核生物的復(fù)制原點(diǎn)原核生物的復(fù)制原點(diǎn)，所以能在大腸桿菌中擴(kuò)增。
（2）將環(huán)狀載體pUC18導(dǎo)入釀酒酵母時(shí)，一般會(huì)將其進(jìn)行酶切得到線性化載體，隨后再將其導(dǎo)入受體細(xì)胞。根據(jù)所學(xué)的知識(shí)推測(cè)酶切得到線性化載體的目的是 線性化載體能整合到釀酒酵母染色體DNA，從而能更穩(wěn)定存在并發(fā)揮功能線性化載體能整合到釀酒酵母染色體DNA，從而能更穩(wěn)定存在并發(fā)揮功能。
（3）提取成功構(gòu)建的表達(dá)載體并導(dǎo)入釀酒酵母菌株，將菌株接種在培養(yǎng)基中以獲得單菌落，培養(yǎng)基中 不需要不需要（需要/不需要）添加組氨酸，原因是 構(gòu)建的表達(dá)載體中含有組氨酸合成酶基因，酵母菌能利用原料合成組氨酸構(gòu)建的表達(dá)載體中含有組氨酸合成酶基因，酵母菌能利用原料合成組氨酸。培養(yǎng)基中需要添加凝固劑 瓊脂瓊脂。
（4）異丁醇的大量積累會(huì)傷害細(xì)胞，研究人員給該工程菌導(dǎo)入一個(gè)經(jīng)改造的光敏蛋白基因，使工程菌對(duì)特定的藍(lán)光敏感。進(jìn)行不同的光照處理，使其在異丁醇產(chǎn)生階段和生長繁殖階段進(jìn)行切換，結(jié)果如圖丙所示。
注：5/10/20hpulse分別代表在黑暗條件下每隔5、10、20h發(fā)出15s和65s的藍(lán)光脈沖30min
①對(duì)照組的酵母菌需要導(dǎo)入 不含光敏蛋白基因的載體不含光敏蛋白基因的載體。
②以葡萄糖為碳源，利用該轉(zhuǎn)基因釀酒酵母進(jìn)行發(fā)酵時(shí)，若想進(jìn)一步提高其異丁醇產(chǎn)量，綜合圖甲和圖丙信息，進(jìn)一步優(yōu)化菌株的措施是敲除該工程菌的 ADHs和ALDsADHs和ALDs基因，可采取的工藝措施是 在黑暗條件下每隔10h發(fā)出15s和65s的藍(lán)光脈沖30min在黑暗條件下每隔10h發(fā)出15s和65s的藍(lán)光脈沖30min。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】便于插入外源（基因）DNA片段；Ca2+處理；原核生物的復(fù)制原點(diǎn)；線性化載體能整合到釀酒酵母染色體DNA，從而能更穩(wěn)定存在并發(fā)揮功能；不需要；構(gòu)建的表達(dá)載體中含有組氨酸合成酶基因，酵母菌能利用原料合成組氨酸；瓊脂；不含光敏蛋白基因的載體；ADHs和ALDs；在黑暗條件下每隔10h發(fā)出15s和65s的藍(lán)光脈沖30min
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/24 8:0:9組卷：1引用：2難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
3．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7