URA3基因位于酵母菌5號染色體上，編碼的酶參與酵母菌尿嘧啶核苷酸的合成。科研人員利用基因工程敲除酵母菌中的URA3基因，以獲得尿嘧啶營養(yǎng)缺陷型酵母菌。敲除過程中利用了PCR技術(shù)，流程如圖所示并回答下列問題：

（1）在PCR過程中，引物的設(shè)計是關(guān)鍵。除圖示引物A1和B2外，還需設(shè)計引物A2和B1，才能通過步驟①和②分別獲得A、B片段。引物A2和B1均由40個核苷酸組成，據(jù)圖分析引物B1的5'端前20個堿基應(yīng)與

C

C

互補(bǔ)，后20個堿基應(yīng)與

B

B

互補(bǔ)。（填下列選項）
A．A片段的模板鏈
B．B片段的模板鏈
C．引物A2
D．引物B2
（2）在不同階段需要添加不同引物才能獲得正確的擴(kuò)增產(chǎn)物。據(jù)圖分析步驟③和④選用的引物種類（“+”代表選用，“—”代表不選用）

引物種類 步驟	引物A1	引物A2	引物B1	引物B2
①	+	+	—	—
②	—	—	+	+
③
④

（3）在引物A1、引物A2組成的反應(yīng)系統(tǒng)中，步驟①形成A片段至少要經(jīng)過

2

2

次復(fù)制。
（4）從獲得的轉(zhuǎn)基因酵母菌中篩選出了多株尿嘧啶營養(yǎng)缺陷型，現(xiàn)需驗(yàn)證這些菌株是因URA3基因缺失而導(dǎo)致的。選擇實(shí)驗(yàn)材料寫出實(shí)驗(yàn)設(shè)計思路。
實(shí)驗(yàn)材料：轉(zhuǎn)基因酵母菌、完全培養(yǎng)基、尿嘧啶缺陷型培養(yǎng)基、含URA3基因的重組質(zhì)粒、不含URA3基因的空質(zhì)粒實(shí)驗(yàn)設(shè)計思路：

將轉(zhuǎn)基因酵母菌隨機(jī)分為兩組，一組導(dǎo)入含有URA3基因的重組載體，一組導(dǎo)入不含URA3基因的空質(zhì)粒，再將兩組酵母菌接種到尿嘧啶缺陷型培養(yǎng)基，觀察生長的狀況

將轉(zhuǎn)基因酵母菌隨機(jī)分為兩組，一組導(dǎo)入含有URA3基因的重組載體，一組導(dǎo)入不含URA3基因的空質(zhì)粒，再將兩組酵母菌接種到尿嘧啶缺陷型培養(yǎng)基，觀察生長的狀況

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