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角蛋白酶（KerA）能降解角蛋白，在飼料工業(yè)中具有廣闊的應(yīng)用前景。實驗小組將KerA基因?qū)氪竽c桿菌中，獲得了能高效表達KerA的工程菌，下圖1為含KerA基因的外源DNA、質(zhì)粒的有關(guān)信息，EcoRⅠ、BamHⅠ、SalⅠ、XhoⅠ均為限制酶，Kanr、Tcr分別為卡那霉素抗性基因、四環(huán)素抗性基因。請回答下列問題：
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（1）為了獲取KerA基因，從天然菌株中提取相應(yīng)的DNA片段，再通過PCR技術(shù)大量擴增，PCR是
聚合酶鏈式反應(yīng)
聚合酶鏈式反應(yīng)
的縮寫，若一個KerA基因在PCR儀中經(jīng)過4次循環(huán)，需要消耗
30
30
個引物。
（2）為了形成合適的重組質(zhì)粒，應(yīng)該選用XhoⅠ和
BamHⅠ
BamHⅠ
限制酶切割外源DNA和質(zhì)粒DNA，其中不選用SalⅠ限制酶的原因是
SalⅠ會破壞目的基因
SalⅠ會破壞目的基因
。
（3）重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細胞的成功率很低，需經(jīng)篩選才能獲得導(dǎo)入成功的受體細胞。結(jié)合圖1獲得的重組質(zhì)粒，從對抗生素的敏感性角度分析，應(yīng)選擇
對四環(huán)素和卡那霉素都敏感
對四環(huán)素和卡那霉素都敏感
的細胞作為受體細胞，才有利于后續(xù)的篩選。
（4）將目的基因?qū)氪竽c桿菌時，常出現(xiàn)三種情況：未轉(zhuǎn)化的細菌、含空載體（普通質(zhì)粒）的細菌、含重組質(zhì)粒的細菌。下圖2是KerA基因重組質(zhì)粒的“工程菌”的篩選示意圖，已知培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分能滿足大腸桿菌的生存，且1號培養(yǎng)基中不含抗生素，那么在篩選重組質(zhì)粒時，2號培養(yǎng)基應(yīng)添加的抗生素是
四環(huán)素
四環(huán)素
，3號培養(yǎng)基添加的抗生素是
卡那霉素
卡那霉素
，2中的
B、D
B、D
（選用圖2中字母作答）菌落為含有目的基因的“工程菌”。

【答案】聚合酶鏈式反應(yīng)；30；BamHⅠ；SalⅠ會破壞目的基因；對四環(huán)素和卡那霉素都敏感；四環(huán)素；卡那霉素；B、D
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/7/31 8:0:9組卷：24引用：3難度：0.6
相似題

  • 菁優(yōu)網(wǎng)1．限制酶a、限制酶b能將某線性DNA分子片段切割，其識別序列和切割位點如圖所示。下列敘述錯誤的是（　?。?/h2>

    發(fā)布：2024/11/10 15:30:3組卷：21引用：5難度：0.7

  • 2．中國甜柿的自然脫澀與乙醛代謝關(guān)鍵酶基因（PDC）密切相關(guān)，推測澀味程度可能與PDC基因的表達情況有關(guān)。
    （1）啟動子位于基因首端，是RNA聚合酶識別和結(jié)合的位點，同時啟動子區(qū)域還存在著許多調(diào)控蛋白的結(jié)合位點，RNA聚合酶和調(diào)控蛋白共同影響了基因的
     
    。
    （2）為篩選PDC基因的調(diào)控蛋白，科研人員進行了下列實驗。
    ①PDC基因的啟動子序列未知，為獲得大量該基因啟動子所在片段，可利用限制酶將基因組DNA進行酶切，然后在
     
    的作用下將已知序列信息的接頭片段連接在PDC基因的上游，根據(jù)
     
    和PDC基因編碼序列設(shè)計引物進行PCR.利用質(zhì)粒A（圖1）構(gòu)建含有PDC基因啟動子片段的重組質(zhì)粒并導(dǎo)入代謝缺陷型酵母菌，用不含
     
    的培養(yǎng)基可篩選出成功轉(zhuǎn)化的酵母菌Y1H。
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    ②質(zhì)粒G（圖2）上的AD基因表達出的AD蛋白與啟動子足夠靠近時，能夠激活后續(xù)基因轉(zhuǎn)錄，因此需獲得待測蛋白與AD蛋白的融合蛋白用于后續(xù)篩選?？蒲腥藛T從中國甜柿中提取RNA，將逆轉(zhuǎn)錄形成的各種cDNA與質(zhì)粒G連接后導(dǎo)入酵母菌，此時應(yīng)選擇質(zhì)粒G中的位點
     
    （填序號1～5）作為cDNA的插入位點，最終獲得攜帶不同cDNA片段的酵母菌群Y187。
    ③重組酵母Y187與Y1H能夠進行接合生殖，形成的接合子含有兩種酵母菌質(zhì)粒上的所有基因。若接合子能在含有金擔(dān)子素的培養(yǎng)基中生存，則推測待測蛋白是PDC基因的調(diào)控蛋白，請結(jié)合圖示闡述作出該推測的理由。

    發(fā)布：2024/11/11 0:0:2組卷：82引用：2難度：0.7

  • 3．PHB2蛋白具有抑制細胞增殖的作用。為初步探究某動物PHB2蛋白抑制人宮頸癌細胞增殖的原因，研究者從基因數(shù)據(jù)庫中獲取了該蛋白的基因編碼序列（簡稱phb2基因），大小為0.9kb（1kb=1000堿基對），利用大腸桿菌表達該蛋白。請回答下列問題：
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    相關(guān)限制酶的識別序列及切割位點（注：箭頭表示切割位點）
    名稱 識別序列及切割位點 名稱 識別序列及切割位點
    HindⅢ A↓AGCTT
    TTCGA↑A    		 EcoRⅠ G↓AATTC
    CTTAA↑G
    PvitⅡ CAG↓CTG
    GTC↑GAC    		 PstⅠ CTGC↓AG
    GA↑CGTC
    KpnⅠ G↓GTACC
    CCATG↑G    		 BamHⅠ G↓GATCC
    CCTAG↑G
    （1）為獲取phb2基因，提取該動物肝臟組織的總RNA經(jīng)RT-PCR獲得大量的目的基因，該過程使用到的酶有
     
    。
    （2）圖1為所用載體圖譜示意圖，圖中限制酶的識別序列及切割位點見表。為使phb2基因（該基因序列不含圖1中限制酶的識別序列）與載體正確連接，在擴增的phb2基因兩端需添加
     
    和
     
    兩種限制酶的識別序列。雙酶切避免了目的基因與載體的
     
    連接，同時減少目的基因與目的基因、載體與載體的連接，以提高重組質(zhì)粒的比例。經(jīng)過這兩種酶酶切的phb2基因和載體進行連接時，需使用的酶是
     
    。
    （3）轉(zhuǎn)化前需用CaCl2處理大腸桿菌細胞，使其處于
     
    態(tài)的生理狀態(tài)，以提高轉(zhuǎn)化效率。
    （4）將轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌接種在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，隨機挑取菌落（分別編號為1、2、3、4）培養(yǎng)并提取質(zhì)粒，用（2）中選用的兩種限制酶進行酶切，酶切產(chǎn)物經(jīng)電泳分離，結(jié)果如圖2，
     
    號菌落的質(zhì)粒很可能是含目的基因的重組質(zhì)粒。
    （5）將純化得到的PHB2蛋白以一定濃度添加到人宮頸癌細胞培養(yǎng)液中，培養(yǎng)24小時后，檢測處于細胞周期（圖3）不同時期的細胞數(shù)量，統(tǒng)計結(jié)果如圖4。分析該蛋白抑制人宮頸癌細胞增殖可能的原因是：將細胞阻滯在細胞周期的
     
    （填“G1”或“S”或“G2/M”）期。
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    發(fā)布：2024/11/13 20:30:2組卷：22引用：3難度：0.6
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