非洲豬瘟是由非洲豬瘟病毒(ASFV)引起的一種急性傳染病,死亡率高達100%。為實現(xiàn)對該病毒快速、準確的早期診斷,可用非洲豬瘟病毒p54蛋白的單克隆抗體作為診斷試劑。制備該單克隆抗體時,需先利用大腸桿菌表達出ASFV的p54蛋白并進行純化,然后利用純化的可溶性p54蛋白制備單克隆抗體。回答下列問題:
(1)將純化的可溶性p54蛋白多次注射到小鼠體內(nèi)可獲得血清抗體,但是血清抗體的特異性差,原因是
血清中多種抗體混合在一起,識別多種抗原,導致特異性差
血清中多種抗體混合在一起,識別多種抗原,導致特異性差
;同時在小鼠的脾臟內(nèi)會產(chǎn)生相應的B細胞。誘導從小鼠脾臟中獲得的B細胞與骨髓瘤細胞融合時,可使用生物誘導劑滅活的病毒
滅活的病毒
促融。
(2)融合的細胞經(jīng)過篩選才能獲得雜交瘤細胞,在此過程中需要進行篩選的原因是細胞的融合是隨機的,反應體系中含有未融合的細胞、融合的具有同種核型的細胞以及雜交瘤細胞
細胞的融合是隨機的,反應體系中含有未融合的細胞、融合的具有同種核型的細胞以及雜交瘤細胞
;獲得的雜交瘤細胞還需進行克隆化培養(yǎng)
克隆化培養(yǎng)
和抗體檢測
抗體檢測
,經(jīng)多次篩選后,才能獲得大量能分泌抗p54蛋白的單克隆抗體的細胞株。
(3)為獲得大量抗p54蛋白的單克隆抗體,通常有兩種途徑:途徑一是將篩選獲得的雜交瘤細胞進行體外培養(yǎng),從細胞培養(yǎng)液中獲取。體外培養(yǎng)細胞時,為保持無毒無菌的環(huán)境,應進行的操作是對培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進行無菌處理;在細胞培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素;定期更換培養(yǎng)液
對培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進行無菌處理;在細胞培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素;定期更換培養(yǎng)液
(答三點)。途徑二是將篩選獲得的雜瘤細胞注入小鼠腹腔內(nèi)增殖,從小鼠腹水中
注入小鼠腹腔內(nèi)增殖,從小鼠腹水中
獲得。
(4)抗p54蛋白的單克隆抗體能快速、準確地診斷出ASFV的原因是該單克隆抗體純度高、特異性強,能與相應抗原發(fā)生特異性結合
該單克隆抗體純度高、特異性強,能與相應抗原發(fā)生特異性結合
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